HEPES è 4 acido hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic (acido) di N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanic, una polvere di cristallo bianca, amplificatore di ioni idrogeno, che può controllare a lungo una gamma costante di pH. L'efficace gamma di amplificatore è pH6.8-8.2. Comunemente usato per preparare l'amplificatore di lisi dell'estrazione della proteina, l'amplificatore della coltura cellulare, ecc.
La costante di dissociazione di HEPES è 7,5. Una volta equimolare la miscelazione di HEPES e del suo Na-HEPES, il pH della soluzione è 7,5. Generalmente, una concentrazione molare fissa di HEPES è preparata in primo luogo e poi il pH è regolato al valore specificato con una forte base (NaOH generalmente comunemente usato). Qui, il NaOH serve soltanto a fornire l'OH. È inoltre possibile usare altre forti basi quale KOH. Quando la differenza di pH è grande, usi il NaOH concentrato. Per regolarsi, usi il NaOH diluito. Se il solido del NaOH si aggiunge direttamente, l'errore è troppo grande e quando il NaOH è esotermico dissolto e cambiare la temperatura può colpire l'accuratezza dell'elettrodo di pH.
Preparazione dell'amplificatore di lisi di HEPES:
Soluzione A di lisi:
Soluzione B di lisi:
HEPES
10mmol/L, pH7.9
HEPES
20mmol/L, pH7.9
KCl
10mmol/L
NaCl
420mmol/L
MgCl2
1.5mmol/L
MgCl2
1.5mmol/L
DTT
1mmol/L
DTT
0.5mmol/L
甘油
5%
glicerina
25%
ED
0.2mmol/L
ED
0.2mmol/L
NP-40
1%
PMSF (aggiunga prima dell'uso)
1mmol/L
PMSF (aggiunga la post-utilizzazione)
0.5mmol/L
aprotinin
3mg/L
aprotinin
5mg/L
leupeptin
3mg/L
leupeptin
5mg/L
pepstainA
2mg/L
pepstainA
3mg/L
Punti:
1. Raccolga le cellule in un tubo del PE ed in una centrifuga (4000r/min, 5min, 4 gradi).
2. Lavi tre volte con PBS, centrifughi come sopra, scarti il surnatante.
3. Aggiunga il μl 100 dell'amplificatore A, incubi su ghiaccio per 10 min, centrifughi (14000 r/min, 1 min) e scarti il surnatante.
4. Risospenda la pallina in 60 microliters dell'amplificatore B, mescoli bene, centrifuga su ghiaccio per 30min, la centrifuga (14000r/min, 15min, 0 gradi), raccolga il surnatante e scarti la pallina.
Fra loro, il ruolo di lysate A pricipalmente è usato per liberare le proteine citoplasmiche e le proteine della membrana, il lysate B è usato per liberare le proteine nucleari, NP-40 è sia un tensioattivo che un detersivo, il suo ruolo è entrambi che distrugga la membrana cellulare (delicata) e può combinarsi con la proteina liberata per impedire la precipitazione, così più della proteina citoplasmica e la proteina della membrana può essere rimossa dopo che il surnatante è rimosso tramite centrifugazione al primo punto. Dopo che la proteina nucleare è estratta, può essere dializzata con lysate A per 2h e combinarsi per il IP; o diluito con altre soluzioni e sostituito con i tubi centrifughi concentrati per il IP o altri esperimenti.
Le materie prime principali dei reagenti diagnostici in vitro di Desheng sono: 1. amplificatore Tris, BICINE, HEPES, CAPS, ZAZZERE, RUBINETTI, EPPS, MOPSO, TUBI, PEP della Banca dei Regolamenti Internazionali; 2. luminol chemiluminescente dei reagenti, isoluminol, estere DMAE-NHS, estere NSP-DMAE-NHS, sale NSP-SA, sale NSP-SA-NHS, idrazide NSP-SA-ADH, estere ME-DMAE-NHS dell'acridina dell'acridina dell'acridina dell'acridina dell'acridina dell'acridina; 3. I reagenti TOOS, CIME, DIFFICOLTÀ, ADPS, ALPI, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS di nuovo Trinder; 4. il gel per gli additivi del tubo della raccolta del sangue, l'eparina del sodio, l'eparina del litio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA della separazione di Anti-irradiamento, promuove il coagulante, la polvere di coagulazione, ecc. inoltre, inoltre produce i media del trasporto del virus e il carbomer 940/980. Amici benvenuti da venire a comprare.