Principi fondamentali per il dosaggio di triidrossimetilamminometano in polvere 77-86-1

Polvere di Tris è ampiamente utilizzata negli esperimenti di biochimica e biologia molecolare grazie alla sua eccellente capacità di tamponamento del pH. Non esiste uno standard fisso per il suo dosaggio, e deve essere regolato in modo flessibile in base alle effettive condizioni sperimentali, seguendo i principi scientifici per garantire la stabilità sperimentale e risultati affidabili. Analizzare la logica della determinazione del dosaggio da tre aspetti: tipo di esperimento, condizioni sperimentali e obiettivi sperimentali.

1, Determinare il dosaggio di base in base al tipo di esperimento

Esperimenti diversi hanno requisiti funzionali diversi per la polvere di Tris, che determina l'intervallo di dosaggio di base. Nelle reazioni PCR, il ruolo principale di Tris è quello di mantenere la stabilità del pH del sistema e fornire un ambiente adatto per la DNA polimerasi. A causa del piccolo volume del sistema di reazione e della sensibilità dell'attività enzimatica al pH, il dosaggio deve essere preciso. Calcolato in base alla concentrazione del tampone preimpostata (10-50 mM), il pH dovrebbe essere stabile intorno a 8,0 per soddisfare i requisiti di legame dell'innesco, estensione del DNA, ecc.

 Polvere di base Tris

Negli esperimenti di elettroforesi su gel, Tris viene utilizzato per preparare tamponi di elettroforesi come TAE e TBE, che non solo mantengono la stabilità del pH, ma aiutano anche nella migrazione degli acidi nucleici. Il dosaggio deve essere combinato con lo scenario: l'elettroforesi su gel di agarosio viene utilizzata per separare i frammenti di DNA e la concentrazione del tampone è solitamente 1 ×, che viene calcolata in base al volume di preparazione (1-5L) e alla concentrazione target; L'elettroforesi su gel di poliacrilammide viene utilizzata per separare acidi nucleici a piccole molecole. La concentrazione e la composizione del tampone vengono leggermente regolate e il dosaggio viene ottimizzato di conseguenza, in modo da garantire la consistenza del pH all'interno e all'esterno del gel e ridurre la diffusione e l'adsorbimento degli acidi nucleici.

2, Regolare i dettagli del dosaggio in base alle condizioni sperimentali

Temperatura, valore di pH iniziale, forza ionica e altri fattori influenzano l'efficienza di tamponamento di Tris e il dosaggio deve essere regolato di conseguenza. Il valore pKa di Tris diminuisce con l'aumentare della temperatura e negli esperimenti ad alta temperatura (reazioni enzimatiche superiori a 50 ℃, elettroforesi ad alta temperatura, ecc.), la capacità di tamponamento diminuisce, richiedendo un appropriato aumento del dosaggio. Se la reazione convenzionale richiede 20 mM a 37 ℃, può essere regolata a 25-30 mM a 55 ℃ per compensare l'effetto della temperatura sul pKa.

Se c'è una grande deviazione tra il pH iniziale del sistema e l'intervallo di tampone ottimale di Tris (7,2-8,8), regolare prima il pH vicino all'intervallo target con una piccola quantità di acido-base, quindi calcolare il dosaggio per evitare un dosaggio improprio; In ambienti a bassa forza ionica (come i sistemi di reazione senza sale), l'efficienza di tamponamento di Tris è migliorata e la quantità può essere ridotta per evitare che una concentrazione eccessiva causi un'anormale pressione osmotica nel sistema, che influisce sull'attività cellulare ed enzimatica molecolare.

3, Ottimizzare il piano di dosaggio in base allo scopo sperimentale

L'obiettivo sperimentale determina la direzione dell'ottimizzazione del dosaggio di Tris. Prendendo "ottenere prodotti di elevata purezza" (come l'estrazione e la purificazione degli acidi nucleici) come esempio, il tampone Tris deve rimuovere le impurità e proteggere l'acido nucleico dalla degradazione. Il dosaggio dovrebbe bilanciare "tampone sufficiente" e "non interferire con i passaggi successivi", e la concentrazione è solitamente impostata a 10-20 mM, che non solo previene la degradazione degli acidi nucleici dovuta alle fluttuazioni del pH, ma evita anche l'interferenza residua con la digestione enzimatica, il sequenziamento e altri esperimenti.

Quando si mira a ottimizzare l'efficienza sperimentale (come lo screening delle condizioni di reazione catalizzata da enzimi), il dosaggio di Tris dovrebbe essere utilizzato come test a gradiente variabile. Per l'esperimento di idrolisi della proteasi, sono stati impostati tre set di soluzioni tampone di 10 mM, 20 mM e 30 mM per determinare il dosaggio ottimale rilevando la resa e la purezza del prodotto, bilanciando efficienza e risparmio. Negli esperimenti di coltivazione a lungo termine (come la manutenzione del tampone di coltura cellulare), il dosaggio dovrebbe considerare il ciclo, aumentare la concentrazione in modo appropriato, far fronte a lenti cambiamenti di pH per lungo tempo e garantire una crescita stabile dei soggetti sperimentali.

In sintesi, la determinazione del dosaggio della polvere di Tris richiede una considerazione completa di molteplici fattori, basata sul tipo di esperimento, combinata con aggiustamenti delle condizioni e ottimizzata in base allo scopo. Nell'operazione pratica, combinare i risultati pre-sperimentali con i valori di riferimento della letteratura per migliorare il piano è necessario per utilizzare appieno il suo effetto tampone e garantire esperimenti fluidi e risultati accurati.

Confezione del prodotto

In qualità di produttore di triidrossimetilamminometano, Desheng ha una guida professionale sul suo utilizzo e dosaggio e fornisce istruzioni. I clienti possono gestire immediatamente e correttamente qualsiasi problema. Se hai intenzioni pertinenti, fai clic sul sito Web per informarti sui dettagli e acquistare!