Applicazione del tampone biologico HEPES 7365-45-9 nel kit di rilevazione della lattato deidrogenasi

Come indicatore chiave nella diagnosi clinica e nella ricerca biologica, la stabilità e l'accuratezza dei kit di rilevazione della lattato-deidrogenasi (LDH) influenzano direttamente l'affidabilità dei risultati sperimentali.Tra i vari componenti del kit di reagenti, il tampone biologico dell'acido etanesulfonico 4-idrossietilpiperazina (Buffer HEPES) è diventato un elemento fondamentale per mantenere la stabilità del pH nell'ambiente di rilevamento grazie alle sue proprietà fisico-chimiche uniche.

Proprietà chimiche e vantaggi dell'HEPES

L' HEPES è un agente tampone biologico zwitterionico, la cui struttura molecolare comprende un anello piperazina, idrossietil e gruppi di acido sulfonico, dotandolo di un' eccellente capacità tampone.Il suo pKa è di 7.55, vicino al valore di pH fisiologico, con prestazioni di tamponamento efficienti nell'intervallo di pH 6,8-8.2, particolarmente adatto per le reazioni biologiche in condizioni da neutre a debole alcaline.L'HEPES presenta i seguenti vantaggi significativi::

Hepes in polvere

1. Basso assorbimento: la sua inertà superficiale può ridurre l'assorbimento non specifico di biomolecole quali proteine ed enzimi, evitando errori sperimentali;

2- stabilità a temperatura: non si decompone facilmente a temperature convenzionali di laboratorio, adatta per esperimenti a lungo termine e conservazione dei campioni;

3Biocompatibilità: non è tossico per le cellule, non influenza l'attività enzimatica o il metabolismo cellulare e soddisfa i requisiti di sicurezza dei test biologici.

Le caratteristiche di cui sopra dell'HEPES possono garantire la stabilità del pH del sistema di reazione,evitare distorsioni dell'attività enzimatica o degradazione del campione causate da fluttuazioni del pH.

Il meccanismo di HEPES nel kit di rilevamento LDH

Il principio fondamentale della rilevazione di LDH è quello di ridurre NAD+ a NADH attraverso una reazione enzimatica, che reagisce con agenti cromogenici (come l'INT) per generare prodotti di formaldeide misurabili.Durante questo processo, lievi variazioni del pH possono influenzare direttamente l'attività enzimatica, l'efficienza di legame del substrato e la velocità di reazione del colore.

1. stabilità del pH: nel sistema di reazione del kit reagente, il tampone HEPES può neutralizzare gli ioni idrogeno o gli ioni idrossido generati durante il processo di reazione, mantenere un pH costante,e assicurare che la reazione enzimatica avvenga in condizioni ottimali;

2. antiinterferenza: la sua caratteristica di bassa resistenza ionica può ridurre l'interferenza delle impurità (come sali e proteine) nel campione sulla reazione,e migliorare la sensibilità e la specificità del rilevamento;

3. Prolungamento della durata di conservazione: durante la fase di stoccaggio del kit di reagenti, l'HEPES può prevenire l'inattivazione degli enzimi o dei reagenti coloranti causata dalla deriva del pH e prolungare il periodo di validità del reagente.

Prendendo come esempio un kit di rilevazione della citotossicità della lattato-disidrogenasi, il suo sistema di reazione comprende tampone HEPES, substrato di lattato, NAD + e reagente colorante.tampone HEPES (pH 7.5) può mantenere stabilmente l'ambiente di reazione enzimatica, garantendo una relazione lineare tra la velocità di generazione di NADH e l'intensità di colore dei prodotti di formaldeide,in modo da quantificare con precisione l'attività della LDH attraverso metodi colorimetrici.

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