Selezione della concentrazione del tampone HEPES 7365-45-9 in coltura cellulare

Il mantenimento di un valore di pH stabile durante la coltura cellulare è uno dei fattori chiave per garantire una crescita e proliferazione cellulare sane.Buffer HEPES) è ampiamente utilizzato nel campo della coltura cellulare come un importante tampone degli ioni di idrogeno a causa della sua capacità di fornire effetti di tamponamento stabili su un ampio intervallo di pH (6,8 a 8,2).Questo articolo esaminerà in dettaglio la selezione delle concentrazioni di HEPES in coltura cellulare, con l'obiettivo di fornire orientamenti pratici ai ricercatori.
 

 
Applicazione di HEPES in coltura cellulare
 
La funzione principale di HEPES in coltura cellulare è di mantenere la stabilità del pH del mezzo di coltura.l'ingresso di anidride carbonica dall'aria nel flacone di coltura può causare un aumento del valore del pH del mezzo di colturaL'aggiunta di HEPES può efficacemente prevenire questo fenomeno e mantenere il pH entro un intervallo appropriato.

 

 
HEPES in polvere
 
Determinare la concentrazione appropriata di HEPES
 
1Differenze di linea cellulare
 
Per alcune cellule particolarmente sensibili ai cambiamenti del pH, come le cellule neuronali, la concentrazione di HEPES è molto variabile.può essere necessario determinare la concentrazione ottimale mediante esperimenti di gradiente di concentrazioneÈ possibile impostare un gradiente di concentrazione di 2 mM dall'intervallo convenzionale di 10 a 25 mM per osservare lo stato di crescita, il tasso di proliferazione,e attività metabolica delle cellule a concentrazioni diverse, al fine di trovare la concentrazione HEPES più appropriata per la linea cellulare.
 
2L'influenza della composizione del mezzo culturale
 
L'HEPES interagisce con altri sistemi di tampone nel mezzo di coltura, come i sistemi di tampone del bicarbonato.la quantità ottimale di HEPES aggiunta può variare di conseguenzaLa ricerca ha dimostrato che aumentare la concentrazione di HEPES a 30 mM riducendo la concentrazione di bicarbonato può mantenere meglio la stabilità del pH per la crescita cellulare e promuovere la proliferazione cellulare.
 
3L'influenza della temperatura
 
La temperatura è un fattore importante che influenza il tasso metabolico delle cellule, che a sua volta influenza la domanda di pH della cellula.L'HEPES può esercitare efficacemente un effetto tamponeTuttavia, per alcune cellule speciali, come alcune cellule di insetti, la loro temperatura di coltura ottimale può essere inferiore.come i cambiamenti di temperatura possono alterare l'attività enzimatica e le vie metaboliche all'interno delle cellule, che può portare a variazioni del tasso di produzione di acidi o alcali.
 
Metodi per migliorare l'effetto tampone dell'HEPES
 
1. Ottimizzare la frequenza di cambiamento del fluido
 
I frequenti cambi di fluido possono causare la diluizione dell'HEPES prima che la sua capacità di tamponamento sia pienamente utilizzata.è fondamentale studiare i tassi metabolici delle diverse linee cellulari e determinare la frequenza appropriata dello scambio di fluidiPer le cellule con un metabolismo lento, l'intervallo tra i cambiamenti di fluido può essere adeguatamente prolungato per garantire l'effetto tampone sostenuto e stabile dell'HEPES nel mezzo di coltura.ridurre l'impatto dei cambiamenti dei fluidi sull'ambiente di crescita cellulare.
 
2. Ridurre le perdite da HEPES
 
Durante lo stoccaggio e l'uso del mezzo di coltura, fattori quali l'esposizione alla luce e l'elevata temperatura possono portare alla degradazione dell'HEPES.si raccomanda di conservare il mezzo di coltura in flaconi di vetro marroni per evitare l'influenza della luce sull'HEPESAllo stesso tempo, quando si configura il mezzo di coltura, si deve seguire il principio dell'uso e della preparazione sul posto per ridurre la perdita di HEPES causata dalla conservazione a lungo termine,assicurare il mantenimento di una concentrazione efficace durante tutto il processo di coltura cellulare, e potenziare l'effetto tampone.
 
 

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