L'HEPES è una specie di tampone anfotero non ionico.Buffer HEPESè 2 - [4 - (2-idrossietil) - 1-piperazinyl] acido etanesulfonico. L'HEPES è una specie di tampone anfoterico non ionico con una buona capacità tamponante nell'intervallo pH 7,2-7.4In questa condizione, il coperchio del flacone di coltura cellulare deve essere stretto per evitare che una piccola quantità di carbonato necessario nel mezzo di coltura si disperda nell'aria.
La maggior parte dei mezzi di coltura contiene il rosso fenolo come indicatore di pH. I mezzi di coltura acidi sono gialli arancioni e i mezzi di coltura alcalini sono rossi scuri.L'HEPES è costoso e può essere tossico per alcune cellule in alte concentrazioni, l'HEPES può essere utilizzato come tampone al posto del bicarbonato per eliminare la limitazione di un ambiente di coltura ad alta concentrazione di CO2.Anche la CO2 e il bicarbonato disciolti sono molto importanti per una buona crescita cellulare.
Esistono due modi per usare HEPES
(1) L'HEPES può essere aggiunto direttamente nel mezzo di coltura preparato secondo la concentrazione richiesta e quindi filtrato per rimuovere i batteri.regolare il pH a 7.2 con LN NaOH dopo dissoluzione, filtraggio e utilizzo dopo sterilizzazione.
(2) Prima dell' uso, 99 ml di mezzo di coltura sono stati aggiunti a 1 ml di mezzo di conservazione e la concentrazione finale è stata ancora di 10 mmol/ L. Metodi: 23,8 g di HEPES sono stati sciolti in 90 ml di acqua doppiamente distillata,regolato al pH 7.5- 8.0 con LN NaOH, e quindi diluito a 100 ml con acqua, filtrato e sterilizzato, sottoimballato in piccoli flaconi (2 ml/ flacone), conservato a 4 °C o - 20 °C.
L'acido etanesulfonico 4-idrossietil piperazina non ha effetti tossici sulle cellule.Quando la concentrazione finale è di 10-50 mmol/L e il mezzo di coltura contiene 20 mmol/L di HEPESPuò essere utilizzato come tampone biologico, tampone di reazione, tampone di pre-ibridazione e tampone di ibridazione per la separazione e l'analisi di componenti nucleari di RNA,e per RNA e t4rna.
Il grado di biologia molecolare è utilizzato per l'etichettatura di RNA3' con t4rna ligasi, la separazione e l'analisi dei componenti del tampone di reazione,Buffer di preibridazione e componenti di buffer di RNA nucleareAdesione cellulare, coltura di aggregazione cellulare a breve termine, tampone per la pulizia dei tessuti e delle cellule.
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