L'intervallo di tampone di Tris è di circa 6-8, che è adatto alla maggior parte degli esperimenti biochimici, in particolare negli esperimenti di ricerca correlati di proteine e acidi nucleici;Buffer EPPSL'esperimento di ricerca è più costoso di Tris, quindi quale è adatto per il metodo Folin fenolo per rilevare l'esperimento proteico?
Il metodo del reagente folin-fenolo è un metodo di base comunemente utilizzato per determinare la concentrazione proteica ed è stato ampiamente utilizzato nel campo della biochimica.L'EPPS (HEPPS) è di solito usato come tampone per il metodo del fenolo di folina per rilevare il contenuto proteico, piuttosto che usare il tampone di Tris.
Per il rilevamento del contenuto proteico si utilizzano i tamponi Tris ed EPPS.
Il principio di colorazione del metodo del fenolo folin per la determinazione del contenuto proteico è lo stesso del metodo del biuret (ma l'EPPS non può essere utilizzato per la rilevazione del biuret/biuret).La differenza è che il secondo reagentePer aumentare la quantità di colore, migliorando così la sensibilità di rilevamento delle proteine.Il metodo del fenolo di folina per il rilevamento del contenuto proteico ha un'elevata sensibilità ed è molto più sensibile del metodo del biuret.Naturalmente, ha anche alcuni svantaggi che richiede molto tempo, la curva standard non è retta, la specificità è scarsa, e ci sono più sostanze interferenti.
Qualsiasi gruppo che interferisce con la reazione di biuret, come -CO-NH2, -CH2-NH2, CS-NH2 e Tris buffer, saccarosio, solfato di ammonio e composti solfidrilici,può interferire con la reazione folina-fenolo e influenzare quest' ultima molto piùInoltre, anche i fenoli e l'acido citrico interferiscono con questa reazione.
Il reagente folin-fenolo è costituito da due reagenti: il primo reagente è costituito da carbonato di sodio, idrossido di sodio, solfato di rame e tartrato di potassio e sodio.Il legame peptidico nella proteina reagisce con la soluzione di tartarato di rame di potassio e sodio in condizioni alcaline per formare un complesso rosso-violatoIl secondo reagente è composto da acido fosfomolibdico, acido fosfotungstico, acido solforico, bromo, ecc. In condizioni alcaline,questo reagente è facilmente ridotto dal gruppo fenolico della tirosina nella proteina per dare una reazione blu, e la sua profondità di colore è proporzionale al contenuto proteico.L'intervallo di misura di questo metodo è di 25-250 μg di proteine.
In sintesi, il vantaggio del metodo Folin fenolo per la determinazione del contenuto proteico è l'alta sensibilità, ma lo svantaggio è che richiede molto tempo e interferisce.Anche Tris puo' causare interferenze.Desheng produce entrambe le sostanze.tamponi biologici, non per dire quale sia la migliore, ma per essere adatta a diversi studi sperimentali.
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