Quando usereste un amplificatore di Hepes?

Il nome completo diBuffer HEPESè l'acido etanesulfonico 4-idrossietilpiperazina, CAS 7365-45-9, HEPES è spesso usato in tamponi biologici, pH range tampone: 6,8-8.2, il componente principale del tampone hepes è l'acido solforico etilico idrossietilpiperazina, l'HEPES è un tampone anfoterico, che è solubile in acqua e non forma complessi stabili con gli ioni metallici.Ha una buona capacità di tamponamento nell'intervallo di pH 7.2-7.4È utilizzato principalmente nei kit di diagnosi biochimica, kit di estrazione di DNA / RNA e kit di diagnosi PCR.

Utilizzato in una varietà di reazioni biochimiche:

1. HEPESbufferè spesso utilizzato come reagente tampone nel mezzo di coltura cellulare di vari tipi di organismi, nell'adesione cellulare, nell'aggregazione e nella coltura cellulare a breve termine e come tampone per la pulizia di tessuti e cellule;

2Nella ricerca proteica, il PIPES è spesso utilizzato come componente ed eluente del tampone di legame nella cromatografia a scambio cationale;

3Nella ricerca del DNA, il PIPES è utilizzato come tampone per il fosfato di calcio e il sistema di formazione dei precipitati del DNA, e come tampone per gli esperimenti di AFM ed elettroporazione.

4Inoltre, l'HEPES ha una certa interferenza nella reazione tra DNA ed enzimi di restrizione, e non è adatto al metodo di Lowry per determinare il contenuto proteico.

5Il tampone HEPES è spesso utilizzato nella ricerca di organelli e di proteine ed enzimi altamente variabili e sensibili al pH, nonché in kit di diagnostica biochimica.Kit di estrazione di DNA/RNA e kit diagnostici PCR.

6. Il buffer di reazione, il buffer di pre-ibridazione e il buffer di ibridazione per la separazione e l'analisi dei componenti nucleari dell'RNA; utilizzato per l'RNA e il T4RNA.Il grado di biologia molecolare viene utilizzato per etichettare l'estremità 3' dell'RNA con T4 RNA ligasi, separare e analizzare i componenti del buffer di reazione, del buffer di pre-ibridazione e del buffer di ibridazione dell'RNA nucleare.

HEPES in polvere

Questioni relative all'HEPES

1Il pH richiesto per la maggior parte delle cellule è 7.2-7.4I fibroblasti preferiscono un pH più elevato (7,4-7,7), mentre il passaggio delle linee cellulari trasformate richiede acidità.0-7.4) Poiché la maggior parte dei fluidi di coltura è tamponata dal sistema di bicarbonato di sodio (NaHCO3) e di CO2,la concentrazione di CO2 nella fase gassosa deve essere in equilibrio con la concentrazione di bicarbonato di sodio nel fluido di colturaSe la concentrazione di CO2 nella fase gassosa o nell'aria dell'incubatrice è fissata al 5%, la quantità di NaHCO3 aggiunta nella soluzione di coltura è di 1,97 g/l; se la concentrazione di CO2 è mantenuta al 10%,la quantità di NaHCO3 aggiunta nella soluzione di coltura è pari a 3.95 g/l. Il tappo del flacone di coltura cellulare non deve essere avvitato troppo strettamente per garantire lo scambio di gas;

2Il valore del pH della soluzione di coltura utilizzando la coppia tampone HCO3 e CO2 è instabile e tende ad essere alcalino dopo una certa conservazione.Se il pH del fluido di coltura cambia troppo rapidamente, il tampone HEPES può essere aggiunto al fluido di coltura fino a una concentrazione finale di 10-25 mM;

3. L'HEPES è un tampone anfoterico, utilizzato principalmente nella ricerca biologica, come la fosforilazione ossidativa, la sintesi proteica in un ambiente sterile, la fosforilazione fotosintetica, la fissazione della CO2, ecc.;L'HEPES non ha alcun effetto sui substrati dell'ionasi metallica ed è adatto per la trasmissione in microscopia elettronica (TEM)L'HEPES (25mM) può essere utilizzato come sostituto del bicarbonato di bicarbonato.o come aggiunta di bicarbonato tampone (10-15mM) per alleviare la restrizione dell'ambiente di coltura ad alta concentrazione di CO2Anche la CO2 e il bicarbonato disciolti sono molto importanti per una buona crescita cellulare.