Il tampone HEPES è l'acido 2- (4- (2-idrossietil) piperazina) etanesulfonico, CAS 7365-45-9. Questo tampone è generalmente utilizzato in esperimenti biochimici per regolare il valore del pH del sistema di reazione,come soluzione di conservazione del virus o soluzione di conservazione delle cellule.
Esistono due tipi diBuffer HEPESLa concentrazione della soluzione di HEPES è di 10- 50 mmol/ L e la capacità tampone può essere raggiunta quando il mezzo di coltura contiene 20 mmol/ L di HEPES.Inoltre, questo tipo di tampone ha molti vantaggi rispetto al tampone fosfato. Non è tossico per le cellule e può controllare l'intervallo di pH costante per lungo tempo. È un buon tampone degli ioni di idrogeno.
Hepes in polvere
La costante di dissociazione del tampone HEPES è di 7,65 (a 20 °C) e l'intervallo del pH del tampone è di 6,6-8.6, che è generalmente adatto per il sistema di reazione con pH 6,8-8.2Può essere usato direttamente con idrossido di sodio, oppure mescolato con sale e pH regolato con idrossido di sodio.
1、 500 ml di 1 mol/ L di HEPES, pH 7.0, soluzione di base: pesare 0,5 mol (119,15 g) di acido idrossietil piperazinaetanosulfonico, quindi regolare al valore di pH richiesto con 0,5 m ~ 1 M di idrossido di sodio,infine fissare il volume con acqua distillata, e sigillare a 4 °C.
2、 HEPES tampone 500 ml con una piccola quantità di sale: HEPES > 6,5 g, NaCl > 8,0 g, na2hpo4,7 h2o > 0,198 g, regolare il valore del pH con 0,5 m di NaOH > soluzione acquosa, infine fissare il volume e conservare a bassa temperatura.
3、 Preparazione di una soluzione di sale tampone 2 × HEPES: 1,6 g di NaCl, 0,074 g di KCl, 0,027 g di na2hpo4,2 h2o, 0,2 g di glucano o di destrano e 1 g di HEPES sono stati sciolti in 90 ml di acqua distillata,regolato al valore di pH richiesto con 0.5m NaOH, e quindi diluito a 100 ml con acqua distillata.
Anche se il sistema tampone dell'HEPES non è così esteso come quello del PBS, ha maggiori vantaggi: la resistenza ionica del PBS è superiore a quella dell'HEPES,e la forza ionica influenzerà la solubilità di altri soluti nella soluzione mistaIn generale, quando è possibile utilizzare il PBS, è possibile utilizzare l'HEPES, ma quando si utilizza l'HEPES, il PBS non può essere sostituito.
Il tampone HEPES è simile al tubo, ma la solubilità in acqua del tubo è scarsa, quindi può essere trasformato in sale di sodio del tubo.che può essere preparato anche in soluzioni tampone pronte all'uso con concentrazioni specifiche, se necessario.
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