Esperimento di verifica di effetto di inattivazione dei media di trasporto del virus

Ci sono due tipi di media del trasporto del virus aggiunti nella tubazione di presa del virus, uno è la soluzione inattivata di conservazione dell'acido nucleico modificato del virus dell'estrazione litica della proteina e l'altro è il mantenimento dell'attività in vitro del virus, il suo acido nucleico e l'antigene modificato basato sul trasporto medio completa la soluzione non inattivata di conservazione. Per le soluzioni inattivate di conservazione, è importante inattivare efficientemente i virus ed impedire l'infezione secondaria.

Differente dal tipo non inattivato, i media inattivati del trasporto del virus si aggiungono con un'alta concentrazione di sale di lisi, che può inattivare efficientemente il virus e può efficacemente impedire l'operatore l'infezione secondaria. Ma inoltre contengono gli inibitori della RNAsi, che possono proteggere l'acido nucleico virale da degradazione, di modo che possono successivamente essere individuati da NT-PCR. L'effetto di inattivazione è verificato sperimentalmente sotto.

1. Materiali di verifica di inattivazione

1 embrione del pollo di SPF (e covato vecchio a 10 giorni da sè)

2 sforzo contagioso del virus IBV QXL87 di bronchite del pollo

3 salini normali (0,9% NaCl), sterilizzato nell'autoclave

4 soluzioni inattivate di stoccaggio del campione, 3 lotti.

5 corredi dell'estrazione del RNA

I media del trasporto del virus inattivano i virus

2. Metodi sperimentali

1. Aggiunga lo sforzo contagioso pronto del virus QXL87 della bronchite del pollo alla soluzione di conservazione, secondo il rapporto di 1 (soluzione virale): 10 (soluzione di conservazione) ed hanno fissato la temperatura ambiente a 18-26℃ per 45min. Il liquido del virus è stato inoculato negli embrioni del pollo di SPF ed il liquido allantoico è stato raccolto.

2. Inoculi il liquido allantoico raccolto in 1 in 10 vecchi embrioni del pollo di SPF dei giorni secondo il metodo allantoico di inoculazione della cavità. Ogni campione è inoculato con 10 embrioni del pollo, 0,1 mL/piece, è disposto in un'incubatrice 37°C per 144 h ed è scartato. Dopo 24 h degli embrioni morti del pollo, osservi e registri 24-44 h delle morti dell'embrione del pollo e del numero degli embrioni in tensione malati dopo l'inoculazione. Osservazione delle lesioni dell'embrione del pollo e la rilevazione dell'acido nucleico del virus contagioso di bronchite del pollo sul fluido allantoico raccolto, riferentesi alla tecnologia diagnostica di bronchite contagiosa del pollo di GB/T 23197-2008, facendo uso del corredo dell'estrazione del RNA per estrarre RNA ed usando metodo una tappa RT-qPCR in tempo reale per la rilevazione del virus.

Raggruppi 1/2/3 di virus aggiunto (100ul) + soluzione di conservazione (900ul); Il gruppo 4 ha aggiunto il virus (100ul) + soluzione fisiologico (900ul); Soluzione aggiunta di conservazione del gruppo 5/6/7 (1000ul). Fra loro, i media del trasporto del virus sono in tre lotti.

3. Risultati sperimentali

Secondo i risultati sperimentali di cui sopra, i gruppi 1, 2 e 3 sono stati inoculati con i preservativi contenenti virus, che hanno indicato che gli embrioni del pollo si sono sviluppati normalmente; il gruppo 4 è stato inoculato con le lesioni fisiologiche virus-aggiunte del pollo ed e soluzione dell'embrione; i gruppi 5, 6 e 7 sono stati inoculati con i preservativi, non mostranti inibizione di crescita dell'embrione del pollo. Ciò indica che la soluzione inattivata di conservazione può inattivare i virus.

Con questo esperimento, possiamo infine indicare che le tre serie di campionamento casuale di Desheng hanno inattivato la soluzione di conservazione possono efficacemente inattivare il virus e non ha effetto inibitorio sulla funzione fisiologica normale delle cellule. Di conseguenza, questi media inattivati del trasporto del virus può inattivare efficientemente i vari virus ed estrarre gli acidi nucleici, che è adatto ad esperimenti di rilevazione dell'acido nucleico RT-qPCR. Naturalmente, in considerazione della prova più veloce, che direttamente è usata per la rilevazione dei pazienti ha diagnosticato con la nuova corona, poche società in Cina agirà in tal modo, perché dopo tutto, il nuovo virus della corona non è così facile da verificarsi!