Tris: aminomethane di trimethylol
Trismethylaminomethane (Tris) è un composto organico con la formula (HOCH 2) 3CNH 2. Tris è usato per preparare gli amplificatori negli esperimenti di biologia molecolare e della biochimica. Sia gli amplificatori di TBE che di TAE (usati per dissolvere gli acidi nucleici) utilizzati negli esperimenti biochimici richiedono Tris, che può condensare con le aldeidi quando contiene i gruppi amminici. Attenuare le caratteristiche Tris è una base debole. Alla temperatura ambiente (25°C), il suo pKa è 8,1. Secondo la teoria di bufferizzazione, l'efficace gamma di bufferizzazione di amplificatore di Tris è fra pH 7,0 e 9,2.
Il pH della soluzione acquosa di base di Tris è circa 1 0,5. Generalmente, l'acido cloridrico si aggiunge per regolare il pH al valore desiderato e poi la soluzione tampone con questo pH può essere ottenuta. Ma allo stesso tempo, l'influenza della temperatura sul pKa di Tris dovrebbe essere controllata.
Poiché l'amplificatore di Tris è una soluzione alcalina debole, il DNA deprotonated in una tal soluzione, quindi migliorante la sua solubilità. La gente aggiunge spesso gli ED alla soluzione tampone dell'acido cloridrico di Tris per fare «l'amplificatore di TE». L'amplificatore di TE è usato per stabilizzazione e stoccaggio del DNA. Se la soluzione acida di pH-regolato è sostituita con acido acetico, quindi «l'amplificatore di TAE» (Tris/Acetate/EDTA) è ottenuto e se è sostituito con acido borico, quindi «l'amplificatore di TBE» (Tris/Borate/EDTA) è ottenuto. Questi due amplificatori sono utilizzati negli esperimenti dell'elettroforesi dell'acido nucleico.
Un Tris-HCl da 1 m. (pH7.4, 7,6, 8,0)
Tris-HCl componente di concentrazione 1M
Volume 1L della preparazione
Metodo della preparazione:
1. Pesi 121.1g Tris in un becher 1L.
2. Aggiunga circa 800ml dell'acqua deionizzata e mescoli per dissolversi.
3. Aggiunga la quantità di HCl concentrato secondo le indicazioni della tavola qui sotto per regolare il pH richiesto.
HCl concentrato pH
7,4 circa 70ml
7,6 circa 60ml
8,0 circa 42ml
4. Porti la soluzione a 1 L.
5. Dopo la sterilizzazione ad alta temperatura ed ad alta pressione, immagazzini alla temperatura ambiente.
Nota: Permetta che la soluzione si raffreddi alla temperatura ambiente prima della regolazione del pH, perché il pH della soluzione di Tris varia notevolmente con la temperatura. Quando la temperatura aumenta da 1°C, il pH della soluzione diminuisce da circa 0,03 unità.
Un Tris-HCl da 1,5 m. (pH8.8)
Tris-HCl componente di concentrazione 1.5M
Volume 1L della preparazione
Metodo della preparazione
1. Pesi 181.7g Tris in un becher 1L.
2. Aggiunga circa 800ml dell'acqua deionizzata e mescoli per dissolversi.
3. Regoli il pH a 8,8 con l'HCl concentrato.
4. Porti la soluzione a 1 L.
5. Dopo la sterilizzazione ad alta temperatura ed ad alta pressione, immagazzini alla temperatura ambiente.
Nota: La soluzione dovrebbe essere raffreddata alla temperatura ambiente prima della regolazione del pH, perché il pH della soluzione di Tris varia notevolmente con la temperatura,
Per ogni aumento 1°C nella temperatura, il pH della soluzione diminuisce da circa 0,03 unità.
I vantaggi dell'amplificatore Tris-HCl sono:
① Poiché la base di Tris è più alcalina, potete utilizzare questo sistema tampone per preparare una soluzione tampone con una vasta gamma di gradi di pH da acido ad alcalino;
② poca interferenza al processo biochimico, nessuna precipitazione con calcio, ioni del magnesio ed ioni di metalli pesanti.
Gli svantaggi sono:
Il ① il pH della soluzione tampone notevolmente è colpito dalla concentrazione della soluzione, la soluzione tampone è diluita dieci volte ed il cambiamento in pH è maggior di 0,1;
Il ② l'effetto di temperatura è grande ed il mutamento di temperatura ha una grande influenza sul pH della soluzione tampone, vale a dire: △pKa/℃=-0.031, per esempio: il pH della soluzione tampone a 4℃=8.4, poi il pH a 37℃= 7,4, in modo da deve essere preparato alla temperatura di uso, l'amplificatore Tris-HCl pronto alla temperatura ambiente non può essere usato a 0 ℃ ~ ℃ 4.
③ è facile da assorbire la CO2 nell'aria, in modo dall'amplificatore pronto dovrebbe essere sigillato strettamente.
Il ④ questa soluzione tampone interferirà con determinati elettrodi di pH, in modo da utilizzi un elettrodo compatibile con la soluzione di Tris.
La soluzione di Tris può assorbire l'anidride carbonica dall'aria, l'attenzione di paga alla sigillatura durante lo stoccaggio, se richiedete la sterilità, voi può aggiungere l'azoturo del sodio.
TE è soluzione tampone degli Tris-ED (10mM Tris, ED di 1mM, pH7.4 pH7.6 pH8.0).
Reagenti comunemente usati di biologia molecolare per dissoluzione del DNA.
Prepari 10×TE l'amplificatore (pH7.4, 7,6, 8,0)
Concentrazione componente: Tris-HCl di 100mM, ED di 10mM
Volume della preparazione: 1L
Metodo della preparazione:
1. Misuri la seguente soluzione e disponga in un becher 1L.
amplificatore Tris-HCl (pH7.4, 7,6, 8,0) di 1M 100 ml
gli ED da 500 millimetri (pH8.0) 20ml
2. Aggiunga circa 800ml dell'acqua deionizzata al becher e mescoli uniformemente.
3. Dopo la regolazione del volume a 1L, sterilizzi a temperatura elevata e ad alta pressione.
4. Immagazzini alla temperatura ambiente.
