Similarità e differenze fra Tris e Tris-HCl e Tris-ED

Tris: trimetilolo aminometano

Il trismetilaminometano (Tris) è un composto organico con la formula (HOCH 2) 3CNH 2.Base Trissia i tamponi TAE che i tamponi TBE (utilizzati per sciogliere acidi nucleici) utilizzati negli esperimenti biochimici richiedono Tris,che può condensarsi con aldeidi quando contiene gruppi amino. Caratteristiche di tamponamento La Tris è una base debole. A temperatura ambiente (25°C), il suo pKa è 8.1Secondo la teoria del buffering, il range di buffering efficace del buffer Tris è compreso tra il pH 7,0 e 9.2.

Il pH della soluzione acquosa di Tris base è di circa 10.5Generalmente, l'acido cloridrico viene aggiunto per regolare il valore del pH al valore desiderato, e quindi si può ottenere la soluzione tampone con questo valore di pH.l'influenza della temperatura sul pKa di Tris deve essere controllata.

Poiché il tampone Tris è una soluzione alcalina debole, il DNA sarà deprotonato in tale soluzione, migliorando così la sua solubilità.Spesso si aggiunge EDTA al tampone dell'acido cloridrico di Tris per fare il tampone TE.Se la soluzione acida regolata per il pH viene sostituita con acido acetico, si ottiene un "TAE buffer" (Tris/Acetato/EDTA),e se sostituito con acido boricoQuesti due tamponi sono utilizzati negli esperimenti di elettroforesi degli acidi nucleici.

1 M Tris-HCl (pH7).4, 7.6, 8.0)

Concentrazione del componente 1M Tris-HCl

Volume di preparazione 1L

Metodo di preparazione:

1Pesate 121,1 grammi di Tris in un bicchiere da 1 litro.

2Aggiungere circa 800 ml di acqua deionizzata e mescolare per dissolvere.

3Aggiungere la quantità di HCl concentrato come indicato nella tabella seguente per regolare il valore di pH richiesto.

pH HCl concentrato

7.4 circa 70 ml

7.6 circa 60 ml

8.0 circa 42 ml

4Portare la soluzione a 1 l.

5Dopo sterilizzazione ad alta temperatura e ad alta pressione, conservare a temperatura ambiente.

Nota: prima di regolare il valore del pH, lasciare raffreddare la soluzione a temperatura ambiente, poiché il valore del pH della soluzione Tris varia notevolmente in base alla temperatura.Quando la temperatura aumenta di 1°C, il pH della soluzione diminuisce di circa 0,03 unità.

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

Concentrazione del componente 1,5 M Tris-HCl

Volume di preparazione 1L

Metodo di preparazione

1Peso 181,7 g di Tris in un bicchiere da 1 litro.

2Aggiungere circa 800 ml di acqua deionizzata e mescolare per dissolvere.

3Regolare il pH a 8,8 con HCl concentrato.

4Portare la soluzione a 1 l.

5Dopo sterilizzazione ad alta temperatura e ad alta pressione, conservare a temperatura ambiente.

Nota: la soluzione deve essere raffreddata a temperatura ambiente prima di regolare il valore del pH, poiché il valore del pH della soluzione Tris varia notevolmente in base alla temperatura,

Per ogni aumento di temperatura di 1°C, il pH della soluzione diminuisce di circa 0,03 unità.

I vantaggi del tampone Tris-HCl sono:

1Dal momento che la base di Tris è più alcalina, è possibile utilizzare questo sistema tampone per preparare una soluzione tampone con un'ampia gamma di valori di pH da acido a alcalino;

2 Piccole interferenze nei processi biochimici, nessuna precipitazione con ioni di calcio, magnesio e ioni di metalli pesanti.

Gli svantaggi sono:

1 Il valore del pH della soluzione tampone è fortemente influenzato dalla concentrazione della soluzione, la soluzione tampone viene diluita dieci volte e la variazione del valore del pH è maggiore di 0.1;

2L'effetto della temperatura è grande e la variazione di temperatura ha una grande influenza sul valore del pH della soluzione tampone, vale a dire:031, ad esempio: il pH della soluzione tampone a 4°C=8.4, il valore del pH a 37°C= 7.4, quindi deve essere preparato alla temperatura d'uso, il tampone Tris-HCl preparato a temperatura ambiente non può essere utilizzato a 0 °C ~ 4 °C.

3 La CO2 nell'aria è facilmente assorbita, quindi il tampone preparato deve essere ben sigillato.

Questa soluzione tampone interferirà con alcuni elettrodi del pH, quindi utilizzare un elettrodo compatibile con la soluzione Tris.

La soluzione di Tris può assorbire l'anidride carbonica dall'aria, prestare attenzione alla sigillatura durante lo stoccaggio, se si richiede la sterilizzazione, si può aggiungere azide di sodio.

TE è il tampone Tris-EDTA (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7,4 pH7,6 pH8,0).

Reagenti di biologia molecolare comunemente utilizzati per la dissoluzione del DNA.

Preparare 10×TE Buffer (pH7).4, 7.6, 8.0)

Concentrazione dei componenti: 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

Volume di preparazione: 1L

Metodo di preparazione:

1Misurare la seguente soluzione e metterla in un bicchiere da 1 litro.

1M Tris-HCl tampone (pH7).4, 7.6, 8.0) 100 ml

500 mM EDTA (pH8.0) 20 ml

2Aggiungere circa 800 ml di acqua deionizzata al bicchiere e mescolare uniformemente.

3Dopo aver regolato il volume a 1L, sterilizzare ad alta temperatura e pressione.

4Conservare a temperatura ambiente.