Parecchi fattori che devono essere considerati prima della reazione di chemiluminescenza

La chimioluminescenza sta diventando sempre più popolare a causa della sua eccellente sensibilità di rilevamento.LuminoloNell'analisi chimica, le reazioni di chemioluminescenza vengono utilizzate per rilevare gli analiti direttamente covalentemente etichettati con composti chemioluminescenti.L'attivazione di un'etichetta chimiluminescente per una reazione luminescente genera un segnale per il rilevamento dell'analitoIl vantaggio di questo metodo è che è più semplice e chiaro, e evita la necessità di etichette più grandi e relativamente "adesive".se si tratta di un'etichetta enzimatica o di un'etichetta diretta, e come determinare l'intensità luminosa deve essere considerato prima di progettare la reazione.

Il metodo comune per generare la chemioluminescenza è quello di utilizzare enzimi etichettati per catalizzare la reazione di chemioluminescenza.Ogni etichetta può innescare molteplici reazioni di chemioluminescenzaIl composto chimiluminescente è fornito in eccesso come substrato enzimatico per garantire la cinetica di saturazione.L'intensità della luce è una funzione lineare della quantità di enzima etichettataL'intensità, il tasso di emissione di fotoni al secondo, è il prodotto della conversione catalitica del substrato e della durata del composto luminescente.

Il grafico di distribuzione intensità/tempo della chemioluminescenza comprende un periodo iniziale di aumento e l'estensione della luminescenza fino al plateau o falso plateau.indica che il substrato è esaurito o che l'enzima è inattivatoIl rilevamento della chemioluminescenza prodotta dagli enzimi offre una grande flessibilità nel processo di misurazione.L'intensità luminosa in qualsiasi momento del tempo che passa attraverso il punto più alto può essere correlata alla quantità di enzimaSe la velocità è un problema di misurazione di tipo pendenza a un punto o a più punti, è possibile misurarla nella parte ascendente.non ci sono molti composti chimiluminescenti adattiI candidati appropriati devono prima avere certe funzioni per consentire la connessione con altre molecole.dovrebbe emettere tutta la luce nel minor tempo possibile.

Quando la chemioluminescenza viene gradualmente emessa nel corso di un periodo di tempo, l'intensità del segnale (fotoni/secondo) diminuisce,e è meglio determinare il numero ottimale di etichette di chimiluminescenza sulle specie da rilevare sulla base dell'esperienzaAnche se teoricamente più tag dovrebbero fornire più fotoni, se i tag sono spaziati troppo vicini, si verificherà un effetto di spegnimento.La superficie e il numero di gruppi derivabili (di solito amino o mercapto) forniscono ulteriori restrizioniIn pratica, fino a 10-20 etichette possono essere legate a una macromolecola.maggiore è la probabilità che l'etichetta interferisca con le sue proprietà di legame.

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