Ragioni dell'elevato fondo del nuovo reagente di Trinder TODB

L' uso diil nuovo reagente di Trinder TODB, il fondo elevato è un problema comune che influisce sui risultati di rilevamento, mentre la sigillatura insufficiente e il lavaggio incompleto dei piatti sono fattori chiave che sono facilmente trascurati durante il funzionamento.Questi due problemi possono causare un aumento anormale dello sfondo del colore a causa di legami non specifici e interferenze da parte di sostanze residueDi seguito è riportata un'analisi dettagliata e una soluzione.

Chiusura inadeguata: la forza trainante "dietro le quinte" dietro combinazioni non specifiche

La funzione del passaggio di blocco è quella di bloccare i siti non leganti sulla superficie del vettore di reazione (come una piastra di assaggio di immunosorbente legata all'enzima).i substrati, coniugati enzimatici e altri componenti del reagente TODB si assorbiranno in modo casuale sulla superficie del vettore, formando un segnale colorato senza la partecipazione della sostanza bersaglio,aumentando direttamente il valore di sfondo.

motivo specifico

1. tempo di tenuta insufficiente: in generale, la tenuta richiede la messa a 37 °C per 60 minuti o a temperatura ambiente per 120 minuti.i siti attivi sulla superficie del vettore non possono essere completamente coperti dalla soluzione di blocco (come il BSA), latte scremato in polvere), e quelle aree idrofobe che non sono bloccate assorbiranno attivamente i componenti proteici nel sistema di reazione TODB, con conseguente colorazione dello sfondo.

2- concentrazione troppo bassa di soluzione bloccante: quando gli ingredienti efficaci della soluzione bloccante sono insufficienti, ad esempio quando il 5% di BSA originale scende a 1%,non si può formare un film protettivo stretto tra le molecoleI componenti quali la perossidasi del rafano nel reagente TODB si attaccano alla parete interna del poro della piastra attraverso interazioni idrofobe.e si verificheranno reazioni non specifiche con il substrato durante la reazione.

3- Fallimento della soluzione di tenuta: se la soluzione di tenuta viene congelata e sciolta ripetutamente o conservata per più tempo della data di scadenza,i componenti proteici all'interno si deterioreranno e perderanno la loro funzione di tenuta, che si traduce in numerosi siti "esposti" sulla superficie del vettore, che diventano la fonte di segnali di fondo.

Lavaggio incompleto del cartone: l'"effetto di accumulo" delle sostanze residue

La funzione principale del lavaggio dei piatti è quella di rimuovere i reagenti liberi non legati (come gli anticorpi non legati, le sostanze precursori del TODB).le sostanze residue continueranno a partecipare allo sviluppo del colore nelle reazioni successive, permettendo l'accumulo di interferenze di sfondo.

Motivo specifico

1. Troppo pochi lavaggi dei piatti: i test convenzionali richiedono il lavaggio del piatto 3-5 volte. Se ridotto a meno di 2 volte, i complessi enzimatici liberi residui nel pozzo non possono essere completamente rimossi,e la reazione reagirà con il substrato TODB, con conseguente ulteriore sviluppo del colore.

2. Troppo residuo di detersivo: dopo il lavaggio della tavola, se i fori sulla carta assorbente non vengono invertiti e asciugati, ci saranno più residui di detersivo in ogni foro,e alcuni componenti all'interno disturberanno l'equilibrio del sistema di reazione TODBAllo stesso tempo, i coniugati enzimatici residui si diffondono nei fori adiacenti con il liquido, causando contaminazione incrociata e sollevando lo sfondo.

3- c'è un problema con la lavatrice: quando l'ago della lavatrice è bloccato o la pressione è insufficiente,gli angoli dei fori della piastra diventeranno aree che non possono essere lavateIl reagente TODB residuo si cristallizza dopo l'essiccazione e partecipa alla reazione quando viene nuovamente sciolto, causando l'oscuramento del colore di fondo locale.

Riassunto: L'efficacia del controllo di fondo è determinata dai dettagli operativi

Anche se la tenuta e il lavaggio delle piastre sono fasi di routine, la loro qualità influenza direttamente il livello di fondo dei reagenti TODB.si raccomanda di adottare il metodo "prolungare il tempo di sigillamento+aumentare il numero di lavaggi delle piastre", combinato con misure quali il controllo della concentrazione della soluzione di tenuta e la regolare taratura della lavatrice,che possono ridurre significativamente il valore di fondo e garantire l'accuratezza dei risultati di rilevamento.

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