Effetto protettivo del aminomethane (idrossimetilico) di tris sulle rotture del filo del DNA

Il danno da radiazioni al DNA avviene di solito in due modi: diretto e indiretto.L'effetto indiretto comporta la radiolisi della soluzione intorno al DNA e la successiva interazione tra DNA e prodotti di radiolisi..

Si stima che l'80% degli effetti letali delle radiazioni ad alta intensità LET siano causati da effetti diretti.che è anche utile per chiarire il meccanismo molecolare di alto effetto biologico relativo di alta radiazione LET.

TRIS base in polvere

Nello studio dei danni del DNA causati dalle radiazioni ionizzanti, è ovviamente utile ottenere risultati sperimentali più accurati e affidabili per selezionare il sistema di dissoluzione del DNA appropriato.Il sistema di dissoluzione più comune del DNA è il tampone, e i suoi componenti principali sono 10 mmol/ L di tris (trimetil aminometano) e 1 mmol/ L di EDTA (acido tetraacetico di etilendiammina) a pH 8.0Diamo un'occhiata ai principi principali dello studio.

DNA plasmidico PUC19 disciolto in acqua pura, 10 mmol/lBase Tris, 1 mmol / L di RA e te tampone è stato irradiato da 100 keV / p.m fascio di ioni di carbonio (energia iniziale 290 MeV / U).La percentuale di varie molecole di DNA in diverse soluzioni è stata analizzata mediante elettroforesi in gel di agarosio, e il numero medio di rotture di singolo filamento (SSB) e di rotture di doppio filamento (DSB) in ciascun plasmido è stato calcolato a dosi diverse.

Si è scoperto che Tris potrebbe proteggere in modo significativo il DNA plasmidico dall' irradiazione da ioni pesanti di carbonio inibendo la produzione di SSB e DSB,mentre l' EDTA potrebbe aumentare la produzione di SSB e inibire la formazione di DSB.

Elettroforetogramma della molecola di DNA pUC19 in diversa soluzione e dose di irradiazione

Dalla figura precedente si può vedere che con l'aumento della dose di irradiazione, la percentuale di DNA supercolato nel DNA totale diminuisce.il contenuto di DNA supercoiled in Tris e te buffer è diminuito lentamenteQuando la dose è stata aumentata a 150Gy, il contenuto di DNA supercolato in Tris e nel tampone era ancora superiore all' 80%, ma il contenuto di DNA supercolato in EDTA e acqua era inferiore al 60%.I risultati hanno mostrato che il DNA in tri produceva meno rotture di filamento rispetto a quello in acqua ed EDTA..

Una serie di risultati ha dimostrato che Tris ha un evidente effetto protettivo contro il danno da rottura del filamento del DNA indotto da irradiazione di ioni di carbonio di 100 keV/L ~ m.il DNA supercoiled era presente per tutto il tempo e mostrava una protezione evidente rispetto all'acqua pura e alla soluzione di EDTA.