Ottimizzazione del metodo delle CIME per determinazione degli acidi grassi liberi

Per la determinazione degli acidi grassi liberi nel siero o nel plasma si utilizza di solito il metodo fotometrico dell'enzima cromogeno Trinder.la rilevazione degli acidi grassi è influenzata da molti fattori, e il metodo di rilevamento deve essere ottimizzato e migliorato per migliorare la precisione del rilevamento.

Principio FFA di rilevamento del cromogeno trinder:

Il metodo di rilevazione ha tre fasi di reazione: gli acidi grassi liberi (FFA o NEFA) reagiscono con l'eccesso di CoA per generare acil-CoA sotto l'azione dell'acetil-CoA sintasi (ACS),e reagisce con l'ossigeno sotto l'azione dell'acetil-CoA ossidasi (ACO)La reazione genera 2,3-transenoyl CoA e perossido di idrogeno, e la reazione di Trinder viene utilizzata per rilevare il perossido di idrogeno, e il contenuto di FFA può essere ottenuto.

Si raccomanda TOPS per la determinazione del FFA del cromogeno

Problemi nei metodi di determinazione e ottimizzazione delle FFA:

1L'eccesso di coenzima A nella reazione interferirà con la reazione del perossido di idrogeno e del cromogeno Trinder, rendendo il risultato complessivo del test basso.La N-etilmaleimide (NEM) può essere usata per rimuovere l' eccesso di coenzima A.La stabilità del NEM e' molto compromessa.

2L'acetil CoA sintetasi e l'acetil CoA ossidasi utilizzate hanno specifiche di substrato diverse per diversi acidi grassi liberi, causando differenze nei risultati di determinazione.Diverse fonti enzimatiche presentano diverse specificità del substrato per acidi grassi liberi con diverse lunghezze della catena CEsistono 6 tipi di FFA nel siero umano, e solo gli enzimi con elevata specificità possono non fare alcuna differenza nei risultati di misurazione.

3A causa dell'influenza del CoA sulla reazione, l'intervallo lineare dei risultati dei dati è ristretto.e deve essere eccessivo, quindi è necessaria interferenza. Meno cromogeno. SCEP non è interferito dal coenzima A ma è instabile. ADOS e TOPS sono meno interferiti dal CoA, e TOPS ha un coefficiente di assorbimento molare più elevato,quindi è un substrato di cromogeno migliore.

4. Aggiungi il complesso di solfidrile DTNB e MIT per ridurre la quantità di NEM. Il gruppo solfidrile di DTNM può reagire con il gruppo solfidrile di CoA per rimuovere l'interferenza al cromogeno.Una piccola quantità di MIT può rimuovere il gruppo solfidrile di CoA e agisce anche come conservanteSulla base dell'uso del cromogeno TOPS, l'interferenza del CoA può essere completamente eliminata e la stabilità è notevolmente migliorata.

Se avete requisiti più elevati per i risultati di determinazione dell'FFA, potete scegliere un kit di qualità superiore sulla base dei punti sopra indicati.Desheng produce le materie prime per l'FFA e altri kit di determinazione dell'indiceSe TOPS viene utilizzato per determinare direttamente l' FFA, a causa della scarsa stabilità della soluzione, si raccomanda di preparare una soluzione di lavoro per l' uso immediato prima dell' uso.