Ottimizzazione del metodo delle CIME per determinazione degli acidi grassi liberi

La determinazione degli acidi grassi liberi in siero o in plasma adotta solitamente il metodo fotometrico degli enzimi del cromogeno di Trinder. Tuttavia, dovuto le caratteristiche di questa prova, la rilevazione degli acidi grassi è colpita da molti fattori ed il metodo di rilevazione deve essere ottimizzato e migliorato per migliorare l'accuratezza della rilevazione.

Principio di rilevazione FFA del cromogeno di Trinder:

Il metodo di rilevazione ha tre punti della reazione: gli acidi grassi liberi (FFA o NEFA) reagiscono con il CoA in eccesso per generare il acile-CoA nell'ambito dell'azione il acetile-CoA di sintasi (ACS) e reagiscono con ossigeno nell'ambito dell'azione il acetile-CoA dell'ossidasi (ACO). La reazione genera 2,3 perossido trans--enoyl di idrogeno e del CoA e la reazione di Trinder è usata per individuare il perossido di idrogeno ed il contenuto di FFA può essere ottenuto.

Le CIME è raccomandata per la determinazione di FFA del cromogeno

Problemi nei metodi di determinazione e di ottimizzazione di FFA:

1. L'eccessivo coenzima A nella reazione interferirà con la reazione del perossido di idrogeno e del cromogeno di Trinder, facente l'intero minimo di risultato dei test. N-ethylmaleimide (ALL'UNANIMITÀ) può essere usato per rimuovere il coenzima in eccesso A. La stabilità di ALL'UNANIMITÀ è molto colpita. Limitato, soltanto una settimana.

2. L'ossidasi del CoA della sintetasi e dell'acetile del CoA dell'acetile usata ha specificità differenti del substrato per gli acidi grassi liberi differenti, causanti le differenze nei risultati della determinazione. Le fonti di enzimi differenti hanno acidi grassi differenti di specificità del substrato gratis con differenti lunghezze a catena di C. Cioè la capacità di risposta è differente. Ci sono 6 generi di FFA in siero umano e soltanto gli enzimi con l'alta specificità a loro possono non fare differenza nei risultati di misura.

3. dovuto l'influenza del CoA sulla reazione, il cammino lineare dei risultati di dati è stretto. Il colore di FFA ha misurato sul mercato è MEHA, TBHB, TOOS, ecc., ma notevolmente è interferito dal CoA e deve essere eccessivo, in modo dall'interferenza è richiesta. Meno cromogeno. SCEP non è ha interferito dal coenzima A ma è instabile. Le DIFFICOLTÀ e le CIME sono più di meno hanno interferito dal CoA e le CIME ha un più alto coefficiente di assorbimento molare, in modo da è un migliore substrato del cromogeno.

4. Aggiunga DTNB complesso solfidrilico ed il MIT per ridurre la quantità di ALL'UNANIMITÀ. Il gruppo solfidrilico di DTNM può reagire con il gruppo solfidrilico di CoA per rimuovere l'interferenza al cromogeno. Una piccola quantità di MIT può rimuovere il gruppo solfidrilico di CoA ed inoltre funge da preservativo. Sulla base dell'uso del cromogeno delle CIME, l'interferenza del CoA può completamente eliminarsi e la stabilità notevolmente è migliorata.

Se avete più alti requisiti dei risultati della determinazione di FFA, potete scegliere un corredo di migliore qualità basato sui punti di cui sopra. Desheng produce le materie prime per il FFA ed altri corredi della determinazione di indice. Se le CIME è usata per determinare direttamente FFA, dovuto la stabilità difficile della soluzione, è raccomandato per preparare una soluzione di lavoro per uso immediato prima dell'uso.