Metodo per la stabilizzazione enzima e del substrato cromogeno nella reazione di Trinder

Nel campo della diagnostica in vitro, la colorimetria enzimatica è un metodo comune per la prova quantitativa o qualitativa dei componenti bersaglio ed è ampiamente utilizzata in Cina,come il metodo di rilevazione della reazione di colore dell'enzima HRP catalizzato dal substrato cromogenicoTOSA causa della partecipazione di enzimi, è molto utile per migliorare la stabilità del substrato di colore dell'attività enzimatica.

Alcuni prodotti di reazione con substrati cromogenici ad elevata assorbenza molare, come TOOS, TOPS, ecc., possono essere utilizzati sia con metodi chimici umidi che con metodi chimici secchi:i reagenti di reazione richiesti (TOOS), 4-AAP) e gli enzimi necessari (HRP) ecc.) È fissato sul vettore della membrana e il campione viene aggiunto a goccia per generare H2O2 e quindi rilasciare nuovo ossigeno ecologico,ossidare il substrato coloranteGli enzimi sono altamente specifici e altamente efficienti nella catalisi.hanno una scarsa stabilità sotto l'influenza della temperaturaI metodi chimici a bagnato permettono di inattivare facilmente gli enzimi quando sono in stato liquido o a basse concentrazioni.

Polvere di TOOS, substrato cromogenico

D'altra parte, la maggior parte dei substrati cromogeni, come TOOS, MAOS, TMB, ecc., sono anche facilmente ossidati lentamente, quindi le loro soluzioni non possono essere esposte all'aria per lungo tempo.Esistono molti modi per migliorare la stabilità degli enzimi biologicamente attivi e dei substrati cromogenici:

1L'aggiunta di un agente protettivo in soluzione enzimatica può rendere stabile l'attività di vari enzimi quali ALT, AST, LDH, ALP, CK in soluzione acquosa o matrice sierica per 2 settimane a temperatura ambiente.ma l'effetto sulla carta di prova chimica secca non è significativo.

2Il metodo di stabilizzazione del substrato per lo sviluppo del colore utilizza tensioattivi e sostanze flavonoidi pigmentate con un gruppo alchile da 8 a 16 atomi di carbonio, ma la formula è complicata.i reagenti sono difficili da acquistare, e l'agente protettivo interferisce con i risultati dei test.

3C'è un agente protettivo che è più riducibile del substrato che sviluppa il colore, ma l'agente protettivo aggiunto contiene amino gruppi primari e spesso provoca reazioni non specifiche.

4- l'uso di coloranti azotici come stabilizzatori del substrato colorante ha un buon effetto stabilizzante e non provoca interferenze;ma la lunghezza d'onda massima di assorbimento del colorante è talvolta vicina a quella dell'agente che sviluppa il colore, il che rende il controllo in bianco un po' più alto.

5. un agente protettivo per il polimero e la sua composizione, che può migliorare la stabilità degli enzimi e dei substrati cromogeni.adatta per la produzione di HRP, CHO, ecc. Enzima adatto per la rilevazione di glucosio, creatinina, acido urico, colesterolo, trigliceridi e altri indicatori.

Si può vedere che vari agenti protettivi esistenti per gli enzimi osubstrati cromogenici, alcuni dei quali sono difettosi, ad esempio ad alto costo, rilevamento biased, e adatti solo per metodi chimici umidi, ecc.,Il metodo richiede ulteriori ricercheDesheng è un produttore di substrati e enzimi cromogenici.