La curva anormale di amplificazione di PCR è causata mediante i media del trasporto del virus?

Nella rilevazione acida nucleica di nuovo coronavirus, la tecnologia molto chiave è l'esperimento quantitativo fluorescente in tempo reale di PCR di acido nucleico, che è la tecnologia di base di nuova rilevazione del coronavirus. Così che effetto fa i media del trasporto del virus usati per il virus i giunti del campionamento che hanno sull'amplificazione di PCR degli acidi nucleici? Questo articolo fa una breve discussione.

Il virus trasporta i media colpisce l'amplificazione acida nucleica di PCR?

Giudizio del risultato dalla curva di amplificazione di PCR:

Lo strumento quantitativo fluorescente di PCR nella nuova rilevazione della corona si è trasformato in in un'attrezzatura sistematica per la ricerca di biologia molecolare. L'elaborazione rapida di questo metodo di rilevazione e l'urgenza del compito di rilevazione inoltre hanno presentato gli più alti requisiti del personale di rilevazione, richiedente li a si intendono di giudizio dei risultati dei dati. Per il giudizio del risultato della PCR quantitativa della fluorescenza, il giudizio più intuitivo è di vedere se la curva di amplificazione è normale. Negli esperimenti normali, incontrerete i problemi con le curve anormali di amplificazione, quali le curve scontate di amplificazione, la ripetibilità difficile fra i pozzi multipli e le curve elevate di amplificazione dei campioni negativi.

Ragioni per la curva anormale di amplificazione di PCR:

1. Confermi se le regolazioni del software sono corrette. Controlli le istruzioni del corredo controllare se il tempo, la temperatura, il numero di ciclo, raccolta della fluorescenza, ecc. sono messi correttamente e se il reagente selezionato contiene ROX come tintura fluorescente di riferimento. Alcuni risultati indicano che la curva di amplificazione del grafico a più componenti non è elevata, che è ovviamente un campione negativo, ma la curva del grafico di amplificazione è elevata, di modo che attraversa la linea della soglia ed invece ha un valore di CT. Ciò è perché il software fa un errore nella deduzione automatica della linea di base. Il metodo manualmente di regolazione della linea di base può essere normale ridefinendo la linea di base.

2. Assicuri che i materiali di consumo e gli accessori dello strumento siano utilizzati correttamente. I materiali di consumo sono più importanti per la PCR in tempo reale. Molte curve anormali di amplificazione sono causate tramite uso improprio dei materiali di consumo.

3. per determinare se i reagenti usati sono normali, in primo luogo determinare se i reagenti sono efficaci, compreso il controllo se i reagenti hanno luogo durante il periodo di validità, se ripetutamente sono congelati e sciolti molte volte e se le condizioni di trasporto sono normali. Se tutto sopra sia normale, quindi dovete considerare se ci sia della negligenza in dettaglio dell'operazione.

Dai punti di cui sopra, può essere visto che i media del trasporto del virus direttamente non colpiranno la curva di amplificazione, soltanto colpirà i campioni del virus, ma questo può essere fatto con un esperimento di controllo con i campioni positivi per determinare se la soluzione di conservazione del virus ha un impatto sui campioni del virus. Ci sono due tipi di media del trasporto del virus di Desheng, sia il tipo inattivato che il tipo attivato è adatto ad esperimenti acidi nucleici di PCR.