La scelta dell'amplificatore biologico giusto per l'esperimento può essere un compito difficile. Ci sono molte opzioni disponibili (Hepes, zazzere, Tris, Banca dei Regolamenti Internazionali-Tris, ecc.), che possono causare facilmente la confusione.
Dopo la comprensione delle queste sfide, Desheng ha preparato una rosa dei candidati per il vostro riferimento quando scelgono i tamponi per ricerca:
1. Gamma di amplificatore
Ogni reagente dell'amplificatore ha una gamma di pH con il più forte potere tampone. Questo potere tampone è determinato solitamente dal pKa del reagente dell'amplificatore. Dovete scegliere un amplificatore con un valore di pKa vicino al mezzo della gamma desiderata (tipicamente, è raccomandato per usare un amplificatore con un valore di pKa che è almeno all'interno di un'unità di pH dell'obiettivo pH).
La gamma applicabile di pH di ogni amplificatore
2. cambiamenti di pH durante l'esperimento
Considerando in anticipo se il pH possa aumentare o la diminuzione durante l'esperimento è critica alla selezione degli amplificatori. Se pensate il pH aumenterà durante l'esperimento, voi deve scegliere un amplificatore con un pKa leggermente superiore al valore ottimale all'inizio dell'esperimento. L'opposto è inoltre vero: se pensate il pH farà diminuire, sceglie un amplificatore con un pKa più basso.
3. Concentrazione dell'amplificatore
La concentrazione dell'amplificatore deve essere regolata per avere potere tampone sufficiente per il sistema sperimentale. Generalmente se la concentrazione dell'amplificatore è troppo bassa, il pH della soluzione non può essere stabilizzato. Per contro, se la concentrazione è troppo alta, l'amplificatore è probabile colpire l'esperimento. Generalmente, è raccomandato per usare una concentrazione più superiore 25mM.
Per i sistemi in cui lo scambio protonico dell'idrogeno non è attivo, una concentrazione di 25-100mM è raccomandata generalmente. Per i sistemi in cui lo scambio protonico può accadere, è raccomandato per usare una concentrazione 20times dell'amplificatore più superiore alla concentrazione molare dei protoni scambiati.
4. Mutamento di temperatura
Dovete fissare il pH della soluzione tampone secondo la temperatura a cui l'esperimento sarà eseguito. La temperatura direttamente colpisce il pKa dell'amplificatore e così il pH ed il potere tampone del sistema. Questa situazione può essere critica nei sistemi biologici, in cui le concentrazioni di ioni idrogeno accurate sono richieste affinchè il sistema di reazione funzionino ad efficienza massima.
Il pKa di alcuni amplificatori (quali i TUBI) è meno sensibile ai mutamenti di temperatura, ma ad altre opzioni (quali TRIS, gli ASSI, i RUBINETTI, TES, o Tricine) di più è colpito da questi cambiamenti.
La figura sotto mostra il cambiamento approssimativo di pKa secondo la temperatura di Desheng Biobuffer:
Variazione approssimativa di pKa di temperatura di Desheng Biobuffer
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