Scegliere la strada giustabiologicobufferIn questo caso, il metodo di analisi può essere molto difficile, poiché sono disponibili molte opzioni (Hepes, Mops, Tris, Bis-Tris, ecc.), che possono facilmente causare confusione.
Dopo aver compreso queste sfide, Desheng ha preparato un breve elenco per il vostro riferimento quando si scegliebuffersali per la ricerca:
1. Intervallo di buffer
Ogni reagente tampone ha un intervallo di pH con il più fortebufferQuesta capacità di buffer è solitamente determinata dal pKa delbufferSi deve scegliere un tampone con un valore di pKa vicino alla metà dell'intervallo desiderato (in genere si raccomanda di utilizzare unbuffercon un valore di pKa almeno entro un'unità di pH rispetto al pH di destinazione).
L'intervallo di pH applicabile di ciascun tampone
2. variazioni del pH durante l'esperimento
La valutazione preventiva dell'eventuale aumento o diminuzione del valore del pH durante l'esperimento è fondamentale per la selezione del prodotto.bufferSe si pensa che il pH aumenterà durante l'esperimento, è necessario scegliere un tampone con un pKa leggermente superiore al valore ottimale all'inizio dell'esperimento.se pensa che il pH diminuirà, scegliere un tampone con un pKa inferiore.
3. Concentrazione del tampone
La concentrazione del tampone deve essere regolata in modo da avere una capacità di tamponamento sufficiente per il sistema sperimentale.il pH della soluzione non può essere stabilizzatoAl contrario, se la concentrazione è troppo elevata, il tampone può influire sull'esperimento.
Per i sistemi in cui lo scambio di protoni dell'idrogeno non è attivo, è generalmente raccomandata una concentrazione di 25-100 mM.bufferConcentrazione 20 volte superiore alla concentrazione molare dei protoni scambiati.
Quando si prepara unbufferla concentrazione della soluzione alla concentrazione di utilizzo prevista.
4. Cambiamento di temperatura
Si deve impostare il pH della soluzione tampone in base alla temperatura alla quale sarà eseguito l'esperimento.e quindi il pH e la capacità di tamponamento del sistemaQuesta situazione può essere critica nei sistemi biologici, dove sono necessarie precise concentrazioni di ioni di idrogeno affinché il sistema di reazione funzioni con la massima efficienza.
Il pKa di alcuni tamponi (come PIPES) è meno sensibile ai cambiamenti di temperatura, ma altre opzioni (comeTRIS, ACES, TAPS, TES o Tricine) sono maggiormente colpite da questi cambiamenti.
La figura seguente mostra la variazione approssimativa del pKa in funzione della temperatura della Biobuffer di Desheng:
Variazione pKa approssimativa della temperatura della biobufera di Desheng
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