Buffer HEPESè acido 4-idrossietilpiperazina-etanosulfanico (acido N?? -a-idrossietilpiperazina-N?? -etanosulfanico), una polvere cristallina bianca, tampone degli ioni idrogeno, in grado di controllare un intervallo di pH costante per lungo tempo.L'intervallo di tampone efficace è di pH 6,8-8.2Utilizzato comunemente per preparare tampone per l'estrazione proteica, tampone per la lisisi, tampone per la coltura cellulare, ecc.
La costante di dissociazione di HEPES è 7.5Quando si mescola equimolarmente HEPES e il suo Na-HEPES, il pH della soluzione è 7.5Generalmente si prepara prima una concentrazione molare fissa di HEPES, e poi il pH viene regolato al valore specificato con una base forte (generalmente comunemente usata NaOH).Il NaOH serve solo a fornire OH. È anche possibile utilizzare altre basi forti come KOH. Quando la differenza di pH è grande, utilizzare NaOH concentrato. Per la sintonizzazione fine, utilizzare NaOH diluito.l' errore è troppo grande, e quando il NaOH si dissolve, l'esotermizzazione e il cambiamento della temperatura possono influenzare l'accuratezza dell'elettrodo del pH.
Preparazione di tampone di lisi HEPES:
| Soluzione di lisi A: |
Soluzione di lisi B: |
| HEPES |
10 mmol/L, pH7.9 |
HEPES |
20 mmol/L, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| DTT |
1 mmol/l |
DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
glicerina |
25% |
| EDTA |
0.2 mmol/l |
EDTA |
0.2 mmol/l |
| NP-40 |
1% |
|
|
| PMSF (aggiungere prima dell'uso) |
1 mmol/l |
PMSF (aggiunta dopo l'uso) |
0.5 mmol/l |
| Aprotinina |
3 mg/l |
Aprotinina |
5 mg/l |
| leupeptina |
3 mg/l |
leupeptina |
5 mg/l |
| Pepstina |
2 mg/l |
Pepstina |
3 mg/l |
Passi:
1. raccogliere le cellule in un tubo EP e centrifugare (4000 r/min, 5 min, 4 gradi).
2Lavare tre volte con PBS, centrifugare come sopra, scartare il supernatante.
3Aggiungere 100 μl di tampone A, incubare sul ghiaccio per 10 minuti, centrifugare (14000 giri/minuto, 1 minuto) e scartare il supernatante.
4. Risospendere il pellet in 60 microlitri di Buffer B, mescolare bene, centrifugare sul ghiaccio per 30 minuti, centrifugare (14000 r/min, 15 min, 0 gradi), raccogliere il supernatante e gettare il pellet.
Tra questi, il ruolo del lisato A è principalmente utilizzato per rilasciare proteine citoplasmatiche e proteine della membrana, il lisato B è utilizzato per rilasciare proteine nucleari, NP-40 è sia un tensioattivo che un detersivo,Il suo ruolo è sia distruggere la membrana cellulare (leve), e può combinarsi con la proteina rilasciata per prevenire la precipitazione,quindi la maggior parte delle proteine citoplasmatiche e proteine della membrana può essere rimossa dopo che il supernatante viene rimosso mediante centrifugazione nel primo passoDopo l'estrazione della proteina nucleare, essa può essere dializzata con lisato A per 2 ore e combinata per IP;o diluiti con altre soluzioni e sostituiti con tubi di centrifugazione concentrati per IP o altri esperimenti.
Le principali materie prime dei reagenti diagnostici in vitro di Desheng sono: 1.Buffer biologico Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. reagenti chimiluminescenti luminolo, isoluminolo, estere di acridina DMAE-NHS, estere di acridina NSP-DMAE-NHS, sale di acridina NSP-SA,Sal di acridina NSP-SA-NHSI reagenti di New Trinder sono TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS.Gel di separazione anti-irradiazione per additivi per tubi di raccolta del sangue, eparina di sodio, eparina di litio, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, promuovono il coagulante, la polvere di coagulazione, ecc. Inoltre, produce anche virus media di trasporto e carbomer 940/980.Benvenuti amici a venire a comprare.
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