Acido 4-idrossietilpiperazina-etanosulfonico, abbreviato comeHEPESin inglese, ha un numero CAS di 7365-45-9.2Come agente tampone biologico, la regolazione del pH è il suo uso più comune ed è molto favorito dai principali produttori nel campo della cura della pelle.Il suo ruolo cruciale nel rilevamento del virus della rabbia è poco noto, e forniremo un'introduzione dettagliata di seguito.
Il dilemma dei metodi tradizionali di rilevazione del virus della rabbia
Quando il virus della rabbia si riproduce nelle cellule infette, di solito non provoca effetti citopatici (CPE), ed è anche difficile formare placche in condizioni di coltura convenzionali.Sebbene molti studiosi in patria e all' estero abbiano stabilito con successo metodi di placca del virus della rabbia sulle cellule embrionali di pollo e sulle cellule BHK-21, questi metodi presentano evidenti inconvenienti: alcuni hanno requisiti estremamente severi per le condizioni sperimentali, che richiedono un controllo preciso di vari fattori quali la temperatura, l'umiditàcomposizione del gas, ecc. Alcune fasi di funzionamento sono complesse e richiedono una formazione a lungo termine da parte di tecnici professionisti per padroneggiarle;La Commissione ritiene che la proposta di direttiva non sia sufficiente..
Applicazione innovativa dell'HEPES nel rilevamento del virus della rabbia
I ricercatori hanno accidentalmente scoperto che l'HEPES può aumentare l'effetto patogeno del virus della rabbia sulle cellule infette.I ricercatori hanno sviluppato in modo innovativo un metodo semplice e veloce di incisione su placche HEPES per il virus della rabbia.
L'HEPES favorisce in modo significativo la formazione di macchie di corrosione
Nell'esperimento, le cellule infette sono state coltivate a 37 °C per 3-5 giorni e poi un gruppo di cellule infette è stato trattato con HEPES.le lesioni cellulari evidenti possono essere chiaramente osservate nella parte inferiore del rivestimentoSuccessivamente, è stata utilizzata una tintura cristallina viola, e le macchie di corrosione sono state chiaramente visibili.il gruppo di cellule infette senza trattamento con HEPES non ha mostrato né effetti citopatici né formazione di placcheQuesto risultato sperimentale dimostra con forza che l'HEPES ha un effetto significativo sulla formazione di placche del virus della rabbia sulle cellule BHK.
Il metodo di incisione HEPES ha un'elevata sensibilità
L'analisi della placca HEPES non è solo facile da eseguire, ma ha anche buone prestazioni nella titolazione dei titoli di infezione virale.I dati sperimentali mostrano che esiste una chiara relazione di titolo tra il numero di placche formate dopo l' infezione virale e la diluizione del virusPrendendo come esempio il ceppo CTN-BHK del virus della rabbia, i titoli di infezione sono stati determinati utilizzando rispettivamente l' HEPES plaque assay e l' assay del topo.si è riscontrato che il numero di placche misurate con il metodo HEPES variava da 10, 0 × 10 ° a 4, 0 × 10 * PFU/ ml, mentre i titoli di infezione misurati con il metodo del topo erano compresi tra 6, 0 - 6, 8 log o 1,0 × 10 ° a 6, 3 × 10/ ml.Questo risultato dimostra pienamente la coerenza di sensibilità tra il metodo HEPES rapido e il metodo del topo..
Il metodo di incisione HEPES presenta importanti vantaggi
Quando si studiano i titoli di infezione dei ceppi del virus della rabbia CTN-181 e CTN-BNK,si è riscontrato che l'uso di HEPES può efficacemente indurre e potenziare l'effetto patogeno del virus della rabbia sulle cellule infetteIl metodo operativo specifico è il seguente: dopo l'infezione virale delle cellule, coltivarle a 37 °C per 3-5 giorni,aggiungere 50-100 mmol/L di HEPES a goccia sul rivestimento del mezzo semisolido di metilcellulosa, colorare con soluzione cristallina viola dopo 24 ore, e asciugare a temperatura ambiente per calcolare direttamente il numero di macchie di corrosione ad occhio nudo.Rispetto alle precedenti relazioni sulla letteratura sui metodi di incisione, questo metodo ha molti vantaggi come velocità, semplicità, economia, sensibilità e facilità di padronanza.
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