Aggiungiamo sempre le soluzioni tampone quando realizza l'elettroforesi del DNA. Le soluzioni tampone comunemente usate includono TAE, che contiene Tris, l'acetato e gli ED e TBE (Tris-borato-ED).
Che cosa è il ruolo dell'amplificatore? Una delle funzioni dell'amplificatore è di mantenere il pH della stalla della soluzione. Quando i passaggi correnti elettrici attraverso l'acqua, una reazione dell'ossidazione si presenta all'anodo per generare l'ossigeno e gli idrogenioni; una reazione di riduzione si presenta al catodo per generare gli ioni di idrossido e dell'idrogeno. L'elettroforesi a lungo termine renderà l'acido dell'anodo ed il catodo alcalini. Un buon sistema tampone dovrebbe avere un forte potere tampone tenere il pH della soluzione ad entrambi i pali basicamente stabile. Un'altra funzione dell'amplificatore dell'elettroforesi è di fare la soluzione ha certa conducibilità per facilitare la migrazione delle molecole del DNA. Il DNA è una sostanza alcalina che è negativamente - fatto pagare durante l'elettroforesi (amplificatore pH=8) e migra dall'elettrodo negativo all'elettrodo positivo.
Un'altra componente dell'amplificatore dell'elettroforesi è ED, lo scopo di cui è di chelatare il plasma di Mg2+ e di impedire l'attivazione della dnasi durante l'elettroforesi. Poiché i bisogni della nucleasi questi ioni, ED possono tenere saldamente questi ioni per evitare la degradazione acida nucleica. Ma dovrebbe essere notato che gli ioni del magnesio sono inoltre cofattori di molti enzimi, quali gli enzimi della restrizione, le DNA polimerasi, ecc., in modo dalla concentrazione di ED non è generalmente troppo alta (solitamente intorno 1mM).
Imballaggio dell'amplificatore di Desheng TRIS
Così quale è migliore, TAE o TBE? Infatti, quale dovrei usare per l'elettroforesi del DNA? Realmente dipende dallo scopo del vostro esperimento. Diamo un'occhiata alla differenza fra i due.
1. La conducibilità di TBE è maggior di quella di TAE. Di conseguenza, rispetto a TAE, TBE è meno probabile causare il surriscaldamento nel carro armato dell'elettroforesi. TBE è raccomandato per l'elettroforesi a lungo termine.
2. L'acido borico è un inibitore di enzimi, in modo da se dovete separare il DNA dell'elettroforesi per la reazione di digestione, è raccomandato per usare TAE come la soluzione tampone dell'elettroforesi
3. TBE è migliore per la separazione dei frammenti più piccoli. Per i frammenti più piccoli di 300bp, la velocità di migrazione in TBE è più veloce su un gel di agarosio di 2%.
4. TAE è adatto a separazione di grandi frammenti. I frammenti più grandi di 2kb migrare più velocemente in TAE (in 0,8% gel di agarosio) e la velocità è circa 10% più veloci di in TBE. TAE è più adatto a recupero della sequenza di DNA. Rispetto a TBE, TAE ha più di alta risoluzione per DNA supercoiled.
Riassumendo, la domanda di se TBE o TAE è non può essere generalizzata meglio. Il sistema tampone più adatto dovrebbe essere selezionato secondo lo scopo sperimentale specifico. L'amplificatore biologico sviluppato da Desheng ha un'ampia gamma di amplificatore e soltanto questo genere di amplificatore è usato. Il sistema può preparare gli amplificatori con una vasta gamma di gradi di pH e può fornire le varie specifiche dell'imballaggio. Amplificatori dell'affare a Desheng biochimico, benvenuto consultarsi ed acquistare.
