La determinazione dell'acido grasso libero (FFA) nel siero è un importante indice di prova biochimica e l'FFA è strettamente correlata alla salute umana.Perché i componenti del siero sono complessi e ci sono molti tipi di FFA, il rilevamento è influenzato da molti fattori, quindi il substrato cromogenoTopsè di solito usato per determinare l'FFA.
Reagente TOPS per il substrato di cromogeno
Fase di determinazione del cromogeno TOPS FFA:
1Nel contenitore, prima aggiungere la soluzione tampone pesata secondo il rapporto della formula, e poi aggiungere ATP, coenzima A, 4-aminoantipirina, attivatore ionico (cloruro di magnesio), stabilizzatore (BSA),e conservante in sequenzaDopo aver aggiunto la quantità adeguata di acqua, aggiungere il tensioattivo, regolare il pH a pH 6-9 con acido cloridrico concentrato, aggiungere acilo-CoA sintasi per ultimo, quindi mescolare e filtrare,e aggiungere acqua distillata al filtrato per ottenere il reagente A in quantità.
2. Aggiungere tampone al contenitore, quindi aggiungere cromogeno TOPS, acqua, tensioattivo a sua volta, regolare il pH a pH 6-9, infine aggiungere HRP e acetil CoA ossidasi, quindi mescolare e filtrare,e quindi aggiungere acqua distillata al filtrato risultante fino a una quantità quantitativa, si ottiene il reagente B.
3. riempire i reagenti sopra indicati in flaconcini e conservarli a 2-8°C. Prendere il reagente A e il campione e mescolarli in un certo rapporto, incubazione per un certo periodo di tempo,e leggere il valore di assorbimento A1; aggiungere il reagente B e mescolare uniformemente, incubare per un certo periodo di tempo e leggere il valore di assorbimento A2.
Preparare il tampone:
In un contenitore di vetro pulito, aggiungere prima il tampone HEPES (tampone di Good, tampone zwitterionico, compreso HEPES, Tris, MES, MOPS, ecc.) pesato secondo il rapporto della formula,aggiungere la quantità appropriata di acqua, e quindi aggiungere il tensioattivo 5 ml/ L TritonX-100, usare acido cloridrico concentrato per regolare il pH a pH 6-9, la quantità è di circa 5 ml/ L, quindi mescolare e filtrare,e quindi aggiungere acqua distillata al filtrato ottenuto in quantità.
Il metodo di utilizzazione dei TOPS comesubstrato cromogenoper rilevare il FFA nel siero o nel plasma ha un'elevata precisione e un piccolo errore di misura, ed è il colore più adatto tra i numerosi cromogeni di Trinder, che è basso contenuto di acetil CoA, alto livello di stabilità,e elevato coefficiente di assorbimento molareOltre ai TOPS, i substrati cromogenici prodotti da Desheng comprendono TOOS, MAOS, ADPS, ecc., adatti per la rilevazione della glicemia e di altri indicatori biochimici.
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