Applicazione del tampone biologico BES nella cromatografia a filtrazione in gel

La cromatografia a filtraggio in gel, nota anche come cromatografia a seta molecolare o cromatografia a esclusione sterica, è una tecnologia di separazione basata sulle differenze di dimensione molecolare.Nella ricerca della biochimica e della biologia molecolare, la cromatografia a filtrazione gel è ampiamente utilizzata nella separazione e purificazione di macromolecole biologiche quali proteine e peptidi.tampone biologicoIl BES svolge un ruolo indispensabile.Buffer BESin cromatografia a filtrazione in gel.

Principi di base della cromatografia a filtrazione in gel

Il principio della cromatografia di filtrazione in gel si basa principalmente sulla diffusione e sullo screening delle molecole nelle particelle di gel.le molecole di diverse dimensioni saranno bloccate in vari gradiA causa del suo grande diametro, le sostanze macromolecolari non sono facili da penetrare nei pori delle particelle di gel, quindi si muovono verso il basso lungo l'intervallo tra le particelle di gel.la velocità di migrazione è veloce, e il percorso è breve, quindi escono prima dalla colonna cromatografica; oltre a diffondersi nel vuoto tra le particelle di gel,Le piccole molecole possono anche entrare nei micropori delle particelle di gelDurante il movimento verso il basso, piccole molecole si diffondono da una particella di gel allo spazio tra le particelle e poi entrano in un'altra particella di gel.Entrano e diffondono continuamente.La velocità di movimento verso il basso delle piccole molecole è inferiore a quella delle grandi molecole, cosicché le molecole di grandi dimensioni nel campione escono prima dalla colonna cromatografica,le molecole medie scorrono più tardiQuesto fenomeno è anche chiamato fenomeno del setaccio molecolare.

Caratteristiche tampone del BES e suo ruolo nella cromatografia di filtrazione in gel

Il BES, in quanto agente tampone zwitterionico, ha eccellenti prestazioni di tamponamento e biocompatibilità.mantenendo così la relativa stabilità del pH della soluzioneQuesta caratteristica rende il BES un regolatore ideale del pH negli esperimenti biochimici.

Nella cromatografia a filtrazione in gel, il ruolo principale del BES è quello di mantenere la stabilità del valore del pH della soluzione.A causa del fatto che la funzione e l'attività di molte biomolecole dipendono da ambienti pH specifici, è fondamentale mantenere un pH stabile della soluzione durante i processi di separazione e purificazione.può assorbire o rilasciare protoni per far fronte a piccoli cambiamenti di pH nella soluzione, garantendo così la stabilità e l'attività delle biomolecole durante il processo di separazione.

Inoltre, il BES può anche regolare la resistenza ionica della soluzione.Aggiustando la concentrazione di BES, la forza ionica della soluzione può essere controllata, influenzando così la velocità di eluzione e l'efficienza di separazione delle proteine.Un'adeguata forza ionica può migliorare l'interazione tra le particelle proteiche e quelle del gel, prolungano il tempo di eluzione delle proteine e migliorano l'efficienza di separazione.

Applicazione di BES nella cromatografia a filtrazione in gel

1. Ottimizzare le condizioni di separazione

Quando si utilizza la cromatografia a filtraggio in gel per separare e purificare le biomacromolecole,è necessario selezionare le condizioni di separazione appropriate in base alle caratteristiche delle molecole bersaglio e alle esigenze sperimentaliIl BES, in quanto soluzione tampone, può ottimizzare le condizioni di separazione regolando parametri quali la concentrazione, il valore del pH e la resistenza ionica.L'aumento della concentrazione di BES e la riduzione del valore del pH possono migliorare la loro interazione con le particelle di gel e migliorare l'efficienza di separazione.

2. Migliorare la purezza della separazione

Poiché la cromatografia di filtrazione in gel si basa sulla dimensione molecolare, nel processo di separazione possono esserci alcune molecole di impurità di dimensioni simili alle molecole bersaglio.Queste molecole di impurità possono competere con le molecole bersaglio per i siti di assorbimento delle particelle di gelUtilizzando il BES come soluzione tampone, è possibile regolare la resistenza ionica e il valore del pH della soluzione,in modo da modificare l'interazione tra le molecole bersaglio e le molecole di impurità e le particelle di gel e migliorare la purezza di separazione.

3. Proteggere la struttura e la funzione delle biomolecole

Nel processo di cromatografia per filtrazione in gel, la struttura e la funzione delle biomacromolecole possono essere influenzate da fattori fisici e chimici.può fornire un ambiente di pH stabile e adatto per proteggere la struttura e la funzione delle biomolecole dall'essere influenzateInoltre, il BES può anche legarsi con alcuni ioni metallici per formare complessi di ioni metallici stabili, evitando così l'effetto distruttivo degli ioni metallici sulle biomolecole.

Conclusioni

In conclusione, il tampone biologico BES ha un ampio valore di applicazione nella cromatografia a filtrazione in gel.le condizioni di separazione possono essere ottimizzate, l'efficienza e la purezza della separazione possono essere migliorate e la struttura e la funzione delle biomolecole possono essere protette.

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