HEPES è una preparazione biochimica importante nell'industria biochimica. È considerato come uno degli amplificatori importanti nel campo della ricerca biologica. Il nome chimico di HEPES è: L'acido di N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonic, il carattere è polvere cristallina bianca, è un acido debole, usati spesso come l'amplificatore zwitterionic e mediatore farmaceutico nell'industria chimica organica. È selezionato spesso come amplificatore per coltura cellulare a causa dei suoi vantaggi:
Prodotti della posizione e dell'amplificatore di Desheng
1. La capacità della decomposizione di HEPES può essere migliorata con l'aumento della temperatura ed essere indebolita con la diminuzione della temperatura, ma rispetto ad altri amplificatori, la sua costante della decomposizione non cambia molto con la temperatura, che fa HEPES l'amplificatore trasformarsi in in amplificatore di A che migliore mantiene la struttura e la funzione dell'enzima. L'amplificatore può controllare un'immagine costante di pH per un periodo più lungo e non ha effetto tossico sulle cellule.
2. Il pH richiesto per la maggior parte delle cellule è 7.2-7.4, HEPES ha un buon potere tampone in questa gamma, ma il pH ottimale varia con il tipo di cellula coltivato. I fibroblasti preferiscono più a pH elevato (7.4-7.7), mentre le linee cellulari subcoltivate richiedono il pH acido (7.0-7.4). La maggior parte del terreno di coltura conta sul bicarbonato di sodio (NaHCO3) e sul sistema di CO2 per attenuare. La concentrazione di CO2 nella fase gassosa dovrebbe essere equilibrata con la concentrazione nel bicarbonato di sodio nel terreno di coltura. In questo caso, il tappo di bottiglia della coltura cellulare non dovrebbe essere avvitato troppo strettamente per assicurare lo scambio di gas. Tuttavia, dopo stoccaggio per un determinato periodo, il pH del sistema tampone aumenterà con la volatilizzazione di CO2. Attualmente, la soluzione della cultura diventa rapidamente porpora quando la cellula è subcoltivata e soffiata, rendente le cellule coltivate con questo terreno di coltura difficili sopravvivere a. Anche se sopravvive a, l'attività è inoltre molto bassa ed il tasso di proliferazione è molto lento. Aggiungendo HEPES alla soluzione della cultura può evitare questo problema. HEPES può essere usato come amplificatore per sostituire il bicarbonato per eliminare la limitazione dell'ambiente della cultura di CO2 di alta concentrazione. La concentrazione finale di amplificatore di HEPES usata è generalmente 10-25mM.
Come usare HEPES:
1. HEPES può direttamente aggiungersi alla soluzione pronta della cultura alla concentrazione richiesta e poi essere sterilizzato con filtrazione. Aggiunga 2,38 grammi di HEPES per 1000ml della soluzione della cultura, regoli il pH a 7,2 con il NaOH del lN dopo la dissoluzione, filtri e sterilizzi e l'uso attualmente, la concentrazione in uso di HEPES è 10 mmol/L.
2. Può anche essere preparato nella soluzione di stoccaggio di 100 x (l mol/L). Prima dell'uso, 99ml della soluzione della cultura si aggiunge alla soluzione di stoccaggio del lml e la concentrazione finale dell'applicazione è ancora 10mmol/L. la l il mol/l (metodo della preparazione della soluzione di riserva di 100 x) HEPES: dissolva 23.8g HEPES in acqua doppio distillata 90ml, regoli il pH a 7.5-8.0 con NaOH 1N, quindi diluisca a 100ml con acqua, filtro e sterilizzi e dispensi le fiale (2ml/bottle), il deposito a 4℃ o -20℃.
Biochimico di Desheng ricordato a che una volta usato come amplificatore per coltura cellulare, HEPES nel terreno di coltura esposto a luce visibile per più di 3h produrrà il perossido di idrogeno che è tossico alle cellule. È raccomandato che il terreno di coltura sia immagazzinato nello scuro.
