Vantaggi di biobuffer HEPES nella coltura cellulare

HEPESè un importante preparato biochimico nell'industria biochimica. È considerato uno degli importanti tamponi nel campo della ricerca biologica. Il nome chimico di HEPES è:Acido N-idrossietilpiperazina-1-etanosulfonicoL'acido zwitterionico è un acido debole, spesso utilizzato come tampone zwitterionico e come intermedio farmaceutico nell'industria chimica organica.È spesso scelto come tampone per la coltura cellulare a causa dei suoi vantaggi:

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1La capacità di decomposizione dell'HEPES può essere aumentata con l'aumento della temperatura e indebolita con la diminuzione della temperatura, ma rispetto ad altri tamponi,la sua costante di decomposizione non cambia molto con la temperatura, il che rendeBuffer HEPESIl tampone può mantenere un pH costante per un periodo di tempo più lungo e non ha effetti tossici sulle cellule.

2Il pH richiesto per la maggior parte delle cellule è 7.2-7.4, l'HEPES ha una buona capacità tampone in questo intervallo, ma il valore ottimale del pH varia a seconda del tipo di cellula coltivata.mentre le linee cellulari sottoculturate richiedono un pH acido (7La maggior parte del mezzo di coltivazione si basa sul bicarbonato di sodio (NaHCO3) e sul sistema di CO2 per il buffering.La concentrazione di CO2 nella fase gassosa deve essere bilanciata con la concentrazione di bicarbonato di sodio nel mezzo di colturaIn questo caso, il tappo del flacone di coltura cellulare non deve essere avvitato troppo strettamente per garantire lo scambio di gas.

Tuttavia, dopo un certo periodo di conservazione, il pH del sistema tampone aumenterà con la volatilizzazione del CO2.la soluzione di coltura diventa rapidamente viola quando la cellula viene sottoculturata e soffiataAnche se sopravvive, l'attività è anche molto bassa, e il tasso di proliferazione è molto lento.L'aggiunta di HEPES alla soluzione di coltura può evitare questo problemaL'HEPES può essere utilizzato come tampone per sostituire il bicarbonato per eliminare la limitazione dell'ambiente di coltura ad alta concentrazione di CO2..

Come usare HEPES:

1L'HEPES può essere aggiunto direttamente alla soluzione di coltura preparata alla concentrazione richiesta e quindi sterilizzato mediante filtrazione.regolare il pH a 7.2 con lN NaOH dopo dissoluzione, filtrare e sterilizzare e utilizzare In questo momento la concentrazione di HEPES da utilizzare è di 10 mmol/l.

2. Può anche essere preparato in 100 x soluzione di conservazione (l mol/L). Prima dell'uso, 99 ml di soluzione di coltura vengono aggiunti a lml soluzione di conservazione, e la concentrazione finale di applicazione è ancora 10 mmol/L.L mol/L (100 x) Metodo di preparazione della soluzione di base di HEPES: dissolvere 23,8 g di HEPES in 90 ml di acqua doppiamente distillata, regolare il pH a 7,5-8,0 con 1N NaOH, quindi diluire a 100 ml di acqua, filtrare e sterilizzare, e distribuire i flaconcini (2 ml/ bottiglia), conservare a 4°C o -20°C.

Desheng Biochemical ha ricordato che quando viene usato come tampone per la coltura cellulare,L'HEPES nel mezzo di coltura esposto a luce visibile per più di 3 ore produrrà perossido di idrogeno tossico per le celluleSi raccomanda di conservare il mezzo di coltura al buio.