L'elettroforesi del gel di agarosio è un metodo comunemente usato per isolamento, l'identificazione e la purificazione delle sequenze di DNA. Quando le molecole del DNA stanno nuotando in gel di agarosio, hanno l'effetto della tassa ed effetto del setaccio molecolare. Le molecole del DNA sono negativamente - fatto pagare nella soluzione di pH sopra punto isoelettrico e nel movimento all'elettrodo positivo nel campo elettrico. dovuto la struttura ripetitiva della spina dorsale del glycophosphate, la stessa quantità di DNA a doppia elica ha quasi la stessa tassa netta, in modo da possono muoversi verso la direzione positiva alla stessa velocità.
Le concentrazioni differenti di gel di agarosio possono separare le sequenze di DNA da 200bp a 50kb. Nella soluzione dell'agarosi, la concentrazione bassa di bromuro di ethidum (eb) si è aggiunta nella soluzione dell'agarosi. La banda del DNA di 10NG ha potuto essere individuata nell'ambito di luce UV. Nel campo elettrico, negativamente - il DNA fatto pagare ha migrato all'anodo in pH8.0.
Il gel di agarosio ha le seguenti caratteristiche:
(1) la dimensione molecolare di DNA nella matrice del gel è inversamente proporzionale al valore del logaritmo basso ed al più grande la molecola, più lenta la migrazione.
(2) la concentrazione dell'agarosi in una dimensione specifica della molecola lineare del DNA è differente dal gel di agarosio nelle concentrazioni differenti. Il logaritmo di mobilità elettroforetica (u) di DNA è collegato linearmente per gelificare la concentrazione (t).
(3) quando la tensione è bassa, il tasso di migrazione di sequenze di DNA lineari è proporzionale alla tensione applicata. Tuttavia, con l'aumento dell'intensità di campo elettrico, la mobilità delle sequenze di DNA con differenti pesi molecolari aumenterà di gamme differenti. Con l'aumento di tensione, l'efficace portata della separazione del gel di agarosio sarà ridotta. Per massimizzare la risoluzione delle sequenze di DNA più grandi di 2KB, la tensione applicata non dovrebbe superare 5V/cm.
(4) il comportamento elettroforetico del DNA della temperatura dell'elettroforesi nell'elettroforesi del gel di agarosio non è colpito dalla temperatura dell'elettroforesi. Il tasso di migrazione relativo di sequenze di DNA di dimensioni differenti non cambia significativamente fra 4 e 30 gradi, ma il gel con una concentrazione bassa di 0,5% o il gel con una bassa temperatura di fusione del punto è relativamente debole, preferibilmente a 4 gradi.
(5) la tintura ha incastonato il bromuro di etidio della tintura fluorescente è stata usata per individuare il DNA in gel di agarosio. La tintura è stata incastonata nelle coppie di basi impilate ed è stata prolungata ed ha dentellato il DNA circolare, rendente lo più rigido e riducente la mobilità lineare di 15%.
(6) la composizione dell'amplificatore dell'elettroforesi di forza ionica e la sua forza ionica colpiscono la mobilità dell'elettroforesi del DNA. In assenza degli ioni, quale uso improprio di acqua distillata per preparare i gel, la conducibilità è movimenti del DNA e minimi appena. Nell'alto amplificatore di forza ionica (quale l'amplificatore di elettroforesi di 10 x), la conduttanza è produzione di calore molto alta ed ovvia.
L'elettroforesi del gel di agarosio è inoltre comunemente usata in isolamento e l'identificazione degli acidi nucleici, quali produzione della mappa dell'endonucleasi dell'identificazione del DNA, della restrizione del DNA, ecc. a causa della sua operazione conveniente, attrezzature semplici, la piccola dimensione del campione e l'alta risoluzione, questo metodo ha quello diventato dei metodi sperimentali comuni nella ricerca tecnica genetica. Il corredo dell'elettroforesi del gel di agarosio contiene 10 semilavorati dell'agarosi, la soluzione veloce ad alta tensione 15mL dell'elettroforesi, il caricamento buffer6x del DNA 200 L, forbici e manuali dell'utente, con 8 il foro 6*6, 6 foro 6*6, 13 foro 6*12, 18 foro 6*12 ed altre specifiche.
